重組促紅細(xì)胞生成素緩釋微球的劑型優(yōu)化研究.pdf

1、本研究旨在考察緩釋微球制備條件對促紅細(xì)胞生成素(EPO)的自然形態(tài)、體內(nèi)藥效等的影響,全面優(yōu)化EPO緩釋微球的制劑工藝。蛋白緩釋經(jīng)30多年的研究還未有成功的產(chǎn)品問世,主要是因?yàn)榈鞍追肿哟嗳醯母呒壗Y(jié)構(gòu)在制劑過程中變性、失活甚至導(dǎo)致有害的免疫反應(yīng)。其中制備過程中的水-油界面和水-氣界面是公認(rèn)的造成蛋白聚集的原因。本人所在課題組開發(fā)了一個(gè)獨(dú)特的材料體系-“水相-水相乳液”,可以在避免接觸親水-疏水界面的前提下將結(jié)構(gòu)脆弱的蛋白藥物包封于可耐受苛

2、刻條件的多糖微粒中,從而使蛋白的自然形態(tài)在制劑過程中得到保護(hù)。本項(xiàng)目中,我們將這一技術(shù)用于EPO緩釋劑型的制備與優(yōu)化。含有165個(gè)氨基酸、30400Da的分子量的EPO是目前所有重組蛋白藥物中全球銷售額最大,用于治療腎病、癌癥化療以及HIV感染引起的多種原因的貧血的藥物。EPO同時(shí)也是最易發(fā)生聚集、變性失活和嚴(yán)重抗體反應(yīng)的蛋白。實(shí)現(xiàn)EPO的緩釋不但有可觀的臨床需求,也可充分證明上述緩釋技術(shù)的可行性。本研究采用促UT-7細(xì)胞生長法對EPO

3、緩釋微球體外釋放影響因素進(jìn)行了考察,并根據(jù)BALB/C小鼠體內(nèi)藥效對EPO微球進(jìn)行了劑型優(yōu)化,優(yōu)化后的EPO緩釋微球體內(nèi)藥效學(xué)作用顯著,與劑量相當(dāng)?shù)乃槃┬拖啾?在大大減少給藥次數(shù)的同時(shí)表現(xiàn)了相當(dāng)?shù)乃幮?。SEC-HPLC法考察了微球中回收的EPO幾乎沒有發(fā)生聚集。采用優(yōu)化后的釋放介質(zhì)檸檬酸鹽緩沖液考察了體外釋放情況,ELISA法檢測結(jié)果顯示優(yōu)化后的緩釋微球在體外釋放實(shí)驗(yàn)中連續(xù)20天釋放出了EPO,突釋及不完全釋放情況也得到了較好的控制。