促紅細(xì)胞生成素預(yù)防阿霉素性心肌病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：阿霉素(doxorubicin，DOX)是臨床高效的抗腫瘤藥物，但其應(yīng)用受限于劑量相關(guān)性心肌病。近年來(lái)有研究表明，促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin，EPO)不僅具有促進(jìn)紅細(xì)胞生成的作用，還有器官保護(hù)作用，但是否對(duì)DOX誘導(dǎo)的擴(kuò)張型心肌病(dilatedcardiomyopathy，DCM)也有保護(hù)作用及其可能機(jī)制如何尚不明確。 目的：通過(guò)體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)觀(guān)察EPO對(duì)DOX誘導(dǎo)的擴(kuò)張型心肌病是否具有預(yù)防性保護(hù)作

2、用，并探討其可能機(jī)制。 方法： 1.體外實(shí)驗(yàn)：新生裸鼠心肌細(xì)胞分離后分為四組，分別為對(duì)照組、DOX組、DOX+EPO組和EPO組。藥物處理24小時(shí)后進(jìn)行凋亡和細(xì)胞形態(tài)分析。 2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：39只Wistar大鼠隨機(jī)分為四組，分別為對(duì)照組、DOX組、DOX+EPO組和EPO組。經(jīng)過(guò)2周藥物處理期和2周藥物洗脫期，對(duì)各組大鼠進(jìn)行以下檢查：①超聲心動(dòng)圖檢查，包括左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDD)、左室收縮末期內(nèi)徑(LVES

3、O)、射血分?jǐn)?shù)(EF)和短軸縮短率(FS)；②血流動(dòng)力學(xué)檢查，包括：左室收縮壓峰值(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)以及左室壓力最大上升速率(+dP/dtmax)和最大下降速率(-dP/dtmax)；③組織病理學(xué)檢查；④凋亡分析；⑤免疫組化染色；⑥半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)；⑦免疫蛋白印跡分析(Westernblot)。將各組數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比并作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果： 1.體外

4、實(shí)驗(yàn)：DOX使培養(yǎng)心肌細(xì)胞的凋亡指數(shù)明顯增高。DOX+EPO組的凋亡指數(shù)明顯低于DOX組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.54±0.74％vs8.36±1.21％，P<0.05)。 2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：①超聲心動(dòng)圖、血流動(dòng)力學(xué)和組織病理學(xué)檢查結(jié)果表明，本研究成功建立了DOX誘導(dǎo)的大鼠DCM模型。②DOX+EPO組與DOX組相比較：LVEDD(4.70±0.27mmvs5.91±0.58mm)、LVESD(1.93±0.21mmvs3.54±0.

5、52mm)、EF(86.55±3.21％vs71.58±3.98％)、FS(59.89±2.52％vs40.35±4.74％)：LVSP(109.56±6.22mmHgvs89.54±4.33mmHg)、LVEDP(4.05±0.76mmHgvs9.17±1.36mmHg)、+dP/dtmax(6127.56±699.42mmHg/svs4197.60±626.32mmHg/s)和-dP/dtmax(5608.24±771.40mmHg

6、/svs4390.03±397.28mmHg/s)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，由此可見(jiàn)，預(yù)防性給予EPO明顯改善了DOX誘導(dǎo)的心功能減退。③組織病理學(xué)檢查顯示，DOX組中部分心肌細(xì)胞斷裂、丟失，萎縮心肌細(xì)胞增多，周?chē)霈F(xiàn)代償性肥厚心肌細(xì)胞，心肌纖維化明顯增多，而DOX+EPO組上述情況明顯好轉(zhuǎn)。④凋亡分析表明，DOX組凋亡細(xì)胞呈小灶性分布，而DOX+EPO組與對(duì)照組類(lèi)似，呈點(diǎn)狀分布，DOX組與DOX+EPO組之間的定量研究具有

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。⑤免疫組化和Westernblot均顯示：凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)在DOX組明顯低于對(duì)照組(0.41±0.05vs0.77±0.06，P<0.05)，而其在DOX+EPO組的表達(dá)接近對(duì)照組的水平；凋亡相關(guān)蛋白Bax的表達(dá)在DOX組明顯高于對(duì)照組(0.16±0.01vs0.04±0.01，P<0.05)，但其在DOX組與DOX+EPO組之間未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。⑥RT-PCR研究顯示：與對(duì)照組相比較，DOX組的Bcl-2mRNA