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文檔簡介
1、研究背景:Sansalvamide A(簡稱SanA)是從海洋真菌(梭霉菌屬)中分離出的一種環(huán)肽類物質(zhì),具有顯著的抗腫瘤能力。
目的:研究Sansalvamide A衍生物H-10對人乳腺癌細胞系(MCF-7細胞和MDA-MB-231細胞)增殖以及端粒酶調(diào)控的影響。探討不同濃度的H-10對人乳腺癌細胞系的形態(tài),生長及其對端粒酶活性表達的影響,并且從基因和蛋白水平初步探討其凋亡作用機制,為臨床治療乳腺癌提供理論和實驗依據(jù)。
2、> 方法:
1將不同濃度的San A衍生物H-10(01020406080μM)與這兩種乳腺癌細胞共同培養(yǎng)24h后,光學(xué)顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的變化。
2采用MTT比色法檢測不同濃度的SanA衍生物H-10(01020406080μ M)作用24h后,對人乳腺癌細胞(MCF-7細胞和MDA-MB-231細胞)生長增殖及活力的抑制作用。
3采用生長曲線的方法檢測40μM H-10作用于人乳腺癌細胞(MCF-7
3、細胞和MDA-MB-231細胞)后,對細胞增殖能力的影響。
4采用劃痕試驗檢測40μM San A衍生物H-10作用于人乳腺癌細胞(MCF-7細胞和MDA-MB-231細胞)0h,6h,12h,24h后,對這兩種細胞遷徙轉(zhuǎn)移能力的影響。
5端粒酶重復(fù)序列擴增法TRAP-PCR檢測不同處理濃度的San A衍生物H-10(01020406080μM)對人乳腺癌細胞(MCF-7細胞和MDA-MB-231細胞)端粒酶活性的影
4、響。
6采用流式細胞術(shù)(Flow cytometry, FCM)檢測40μM San A衍生物H-10作用于人乳腺癌細胞(MCF-7細胞和MDA-MB-231細胞)24h后,對細胞凋亡率以及細胞周期分布的影響。
7 RT-PCR法檢測人乳腺癌細胞(MCF-7細胞和MDA-MB-231細胞)在不同濃度的San A衍生物H-10(01020406080μM)處理24h后,對c-Myc,Bcl-2,hTERT基因表達的影響
5、。
8免疫印跡技術(shù)(Western blot)檢測人乳腺癌細胞(MCF-7細胞和MDA-MB-231細胞)在不同濃度的San A衍生物H-10處理下,c-Myc,Bcl-2,hTERT蛋白表達的差異和變化。
結(jié)果:
1隨著SanA衍生物H-10藥物濃度的增加,細胞開始出現(xiàn)皺縮,變圓,脫落,體積變小等形態(tài)學(xué)方面的改變,并且可見凋亡小體。而對照組細胞大小均勻,生長密集。
2 MTT實驗結(jié)果顯示,San
6、A衍生物H-10對人乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖具有顯著地抑制作用,并且存在濃度依賴性,與對照組相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
3人乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231經(jīng)40μ M SanA衍生物H-10作用后,生長增殖能力降低,且明顯低于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
4人乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231經(jīng)40μM SanA衍生物H-10作用后,細胞的遷
7、移速度減慢,且明顯低于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)。
5 SanA衍生物H-10對這兩種乳腺癌細胞的端粒酶活性都有抑制作用,且隨著藥物濃度的增加活性水平逐漸減弱,呈劑量依賴性減少,并且對雌激素陽性的MCF-7細胞的作用更加明顯(p<0.05)。
6流式細胞術(shù)分析結(jié)果顯示,401μ M的SanA衍生物H-10作用于人乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-23124h后,細胞出現(xiàn)明顯的凋亡峰,S期細胞增加,G
8、0/G1和G2/M期的細胞減少(p<0.05)。
7 RT-PCR實驗結(jié)果顯示,隨著SanA衍生物H-10藥物濃度的增加,這兩種人乳腺癌細胞的c-Myc,Bcl-2 mRNA水平穩(wěn)定下降,且hTERTmRNA的表達水平也有所下降。與對照組相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
8 Western blot結(jié)果顯示,San A衍生物H-10能下調(diào)hTERT,c-Myc,Bcl-2蛋白的表達水平顯著降低(p<0.05
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