嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒全基因組基因的克隆及SARS-Cov分子富集檢測體系的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、由于SARS的高度傳染性,對SARS患者及早診斷、及早隔離是阻斷SARS傳染鏈,防止SARS傳播、蔓延的有效途徑.WHO總結(jié)了全球科學家的研究成果,認為SARS的早期診斷主要依靠以RT-PCR技術為主的病原體核酸檢測.本研究根據(jù)國際基因庫公布的SARS基因序列,利用分子生物學軟件選定了SARS冠狀病毒基因的高保守區(qū)域,并在此區(qū)域設定了巢式RT-PCR檢測體系;并利用自行制備的帶有目的片段的克隆,制備目的RNA標準物質(zhì),進行巢式RT-PC

2、R檢測體系的各種條件優(yōu)化和敏感度評價.結(jié)果表明,使用SuperScript Ⅱ逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)時,檢測體系最低可檢測到1個拷貝/反應,而使用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)時,檢測體系最低可檢測到10個拷貝/反應.以確立的磁捕法SARS冠狀病毒RNA富集體系為基礎,本研究還初步探索了SARS冠狀病毒RNA的磁捕提取方法.結(jié)果表明,對于SARS冠狀病毒培養(yǎng)物,磁捕提取方法可穩(wěn)定地提取到SARS冠狀病毒RNA,具有特異性高、富集能力強的優(yōu)點,該項研究可為今后

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