RORα在胃癌組織及DADS誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞中差異表達的初步研究.pdf

1、本文分兩部分論述了RORα在胃癌組織及DADS誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞中差異表達的初步研究。 第一部分：DADS處理人胃癌細(xì)胞前后RORα蛋白的差異表達 目的：在前期工作的基礎(chǔ)上，研究二烯丙基二硫（diallyl disulfide, DADS）處理不同分化程度的人胃癌細(xì)胞前后RORα蛋白表達變化情況，探討RORα與DADS誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞分化的關(guān)系，為尋找其作用新靶點提供理論依據(jù)。 方法：在倒置顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡下觀察

2、DADS處理前后體外培養(yǎng)的人胃癌細(xì)胞形態(tài)變化；采用免疫細(xì)胞化學(xué)、間接免疫熒光流式細(xì)胞術(shù)、Western blot分析RORα在人胃癌細(xì)胞中蛋白水平的表達；半定量RT-PCR檢測RORα在人胃癌細(xì)胞中核酸水平的表達。 結(jié)果： 1．形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，DADS處理人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28細(xì)胞24h后，部分細(xì)胞浮起、變圓，體積縮小，貼壁細(xì)胞形態(tài)大小較一致，核仁減少或消失，異型性減小，細(xì)胞間隙增大

3、。 2．免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示，DADS處理人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28細(xì)胞24h后，RORα蛋白在細(xì)胞核呈強陽性表達，與對照組的陰性或弱陽性表達相比，明顯上調(diào)。 3．間接免疫熒光流式分析顯示，DADS處理人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28細(xì)胞24h后， RORα蛋白表達百分率分別為9.0±1.20、7.4±1.32、26.0±0.14、5.3±1.32，與對照組6

4、.0±1.20、4.4±0.8、12.4±0.02、5.0±0.29相比，有上調(diào)趨勢，其中SGC7901和MGC803有統(tǒng)計學(xué)意義（P <0.01和P <0.05）。DADS處理人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28細(xì)胞24h后，RORα蛋白表達熒光強度分別為35.11±6.34、26.14±3.40、37.65±6.08、29.44±4.29，較對照組的13.90±1.80、9.6±2.88、15.32±4.08

5、、13.45±3.81顯著上調(diào)，差異有顯著性（P <0.01或P <0.05）。 4．半定量RT-PCR灰度掃描定量分析結(jié)果顯示，DADS 處理24h后，RORα蛋白表達在SGC7901、MGC803細(xì)胞中的1.09±0.01、0.97±0.01較對照組的0.45±0.03、0.44±0.02顯著上調(diào)（P <0.01）；在BGC823和MKN28細(xì)胞的1.01±0.02、0.91±0.01較對照組的0.68±0.01、0.72±

6、0.01明顯升高（P <0.05）。 5．Western blot分析灰度掃描顯示，DADS處理人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28細(xì)胞8、12、24h后，RORα蛋白表達分別為0.71±0.03、0.69±0.01、0.80±0.02、0.79±0.01，0.87±0.01、0.86±0.01、0.93±0.01、0.88±0.02和1.31±0.01、1.14±0.04、1.44±0.03、0.96±

7、0.02，較未處理組的0.32±0.01、0.43±0.01、0.38±0.01、0.68±0.02明顯上調(diào)，差異有顯著性（P <0.01或P <0.05）。 結(jié)論： 1．DADS可誘導(dǎo)人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28細(xì)胞RORα蛋白表達上調(diào)。 2．DADS可能通過上調(diào)RORα蛋白表達誘導(dǎo)人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MNK28細(xì)胞分化。 第二部分：RORα

8、蛋白在胃癌、癌旁及正常胃黏膜組織中的表達 目的：通過組織芯片（tissue chip）檢測胃癌、癌旁及正常胃黏膜組織中RORα蛋白表達，探討RORα與胃癌的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，為尋找胃癌腫瘤標(biāo)記物提供一定的實驗依據(jù)。 方法：應(yīng)用組織芯片技術(shù)及免疫組織化學(xué)方法檢測90例胃癌組織、48例癌旁胃黏膜組織與22例正常胃黏膜組織中RORα蛋白的表達情況，研究RORα蛋白與胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。 結(jié)果：組織芯片制作結(jié)果：90例胃癌

9、、48例癌旁胃黏膜與22例正常胃黏膜的組織芯片陣列設(shè)計合理，點陣排列整齊，常規(guī)切片HE染色證實每個組織點結(jié)構(gòu)完整，組織形態(tài)良好，具有代表性，完全符合研究需要。免疫組化結(jié)果顯示，胃癌組織中RORα蛋白表達下調(diào)。正常胃黏膜、癌旁胃黏膜和胃癌組織中RORα蛋白陽性表達率分別為83.36％（19/22），56.25％（27/48）和24.44％（22/90），三者相比有顯著性差異（P <0.05）。不同組織學(xué)類型的胃癌組織中RORα蛋白陽性表達

10、率不同，隨胃癌組織分化程度下降呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢。在高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌、粘液腺癌和印戒細(xì)胞癌中，RORα蛋白陽性表達率分別為45.00％（9/20）、27.59％（8/29）、14.29％（3/21）、9.05％（1/11）和11.11％（1/9）。高分化腺癌RORα蛋白陽性表達率高于低分化腺癌，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P <0.05）。 結(jié)論： 1．胃癌組織中RORα表達顯著低于正常胃黏膜及癌旁胃黏膜，癌