海洋生物活性物質(zhì)SBH-Ⅰ的神經(jīng)保護和神經(jīng)發(fā)生增強作用.pdf

1、神經(jīng)退行性疾病是一類嚴重影響人類健康的常見病，這類疾病的共同點是都出現(xiàn)神經(jīng)細胞退行性病變。近年來提出了神經(jīng)細胞保護(neuroprotection)與神經(jīng)發(fā)生增強(neurogenesis-enhancing)的概念，用具有神經(jīng)元保護及神經(jīng)發(fā)生增強作用的活性物質(zhì)治療急性和慢性神經(jīng)元退行性疾病是一個新的課題。開發(fā)具有神經(jīng)活性的天然活性物質(zhì)更是近年來研究的熱點，而海洋生物已成為新天然產(chǎn)物的主要來源。如今，已經(jīng)從具有藥理活性的1000多種海洋

2、生物中分離出3000多種有醫(yī)用價值的活性物質(zhì)，這些生物活性物質(zhì)包括多肽類、糖類、萜類、生物堿類、大環(huán)內(nèi)酯類和聚醚類等化合物。所以，從海洋生物活性物質(zhì)中尋找具有神經(jīng)元保護及神經(jīng)發(fā)生增強作用的海洋生物活性物質(zhì)是一個令人感興趣的課題。 SBH-I是本實驗室從海洋生物.網(wǎng)球藻提取的活性物質(zhì)。SBH-I經(jīng)本實驗室前期的實驗證實其能夠修復谷氨酸誘導的神經(jīng)毒性小鼠的腦損傷。 目的： 本課題用大鼠嗜鉻神經(jīng)瘤細胞PC12細胞作為

3、模型，檢測SBH-I是否對神經(jīng)細胞有一定保護作用、是否具有神經(jīng)發(fā)生增強作用，以及觀察經(jīng)過SBH-I誘導分化的PC12細胞通過側(cè)腦室移植對谷氨酸誘導的神經(jīng)興奮毒性小鼠腦損傷模型的影響。 方法： 1選用神經(jīng)細胞的模式細胞株P(guān)C12細胞作為實驗對象，建立過氧化氫和地塞米松誘導的PC12細胞損傷模型。利用MTT法檢測SBH-I對損傷細胞的細胞活力的影響；AO/EB熒光染色法觀察細胞形態(tài)變化檢測SBH-I對細胞凋亡率的影響。

4、 2用不同濃度的SBH-I作用PC12細胞，MTT法檢測SBH-1作用24h對細胞增殖的影響，倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)6h、24h、48h、72h、5d、及7dPC12細胞的形態(tài)學變化，免疫組織化學化法檢測培養(yǎng)到第七天時神經(jīng)元特異蛋白.神經(jīng)絲蛋白(NF-1)表達的情況。 3以小鼠為實驗對象，采用谷氨酸鈉灌胃法建立神經(jīng)毒性損傷的動物模型，通過側(cè)腦室注射經(jīng)SBH-I誘導分化的PC12細胞，應用Y迷宮法檢測小鼠學習記憶能力的變化，以研究

5、SBH-I誘導分化的PC12細胞在體內(nèi)模型中對神經(jīng)毒性損傷小鼠學習與記憶行為能力改善的情況。 結(jié)果： 1.用5-80μmol/L的SBH-I預處理PC12細胞，然后分別再加入100μmol/mLH2O2和100μmol/mLDXM造成損傷。MTT法與AO/EB熒光染色法檢測結(jié)果表明，與損傷模型組相比，濃度為10、20、40μmol/L的SBH-I不僅能促進PC12細胞增殖，還能夠提高H2O2及地塞米松誘導損傷的PC12細

6、胞的存活率，減少損傷，具有明顯的神經(jīng)保護作用。其中，20μmol/mL的SBH-I作用最明顯。 2.用0.8-5.6mmol/L的SBH-I作用大鼠嗜鉻細胞瘤PC12細胞，形態(tài)學觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)PC12細胞在作用6h后就開始有部分細胞發(fā)生形態(tài)學變化并長出突起，并隨著時間的延長，出現(xiàn)突起的細胞以及突起的長度都在增加。MTT測定結(jié)果表明，SBH-I作用24h，各作用濃度明顯的抑制PC12細胞增殖，促使其向神經(jīng)元分化。培養(yǎng)到第七天，免疫組