SBH-2對(duì)谷氨酸單鈉所致小鼠神經(jīng)毒性的保護(hù)作用.pdf

1、過(guò)量的谷氨酸對(duì)神經(jīng)元有損傷作用，即興奮性毒性（Excitotoxicity）。谷氨酸（Glutamate，Glu）是人及哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)興奮性神經(jīng)遞質(zhì)中最重要的氨基酸。在生理情況下，谷氨酸作為內(nèi)源性興奮性神經(jīng)遞質(zhì)參與機(jī)體的多種生理活動(dòng)，與快速興奮性突觸傳遞、腦發(fā)育調(diào)節(jié)等多種機(jī)能有關(guān)，并在學(xué)習(xí)和記憶、樹(shù)突及突觸結(jié)構(gòu)的發(fā)育、神經(jīng)元的生長(zhǎng)和退化、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中突觸的可塑性維持、神經(jīng)元回路的形成中起重要作用。在病理情況下，細(xì)胞外谷氨酸

2、濃度的異常增高，過(guò)度刺激其受體，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有明顯的毒性作用。多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病如缺血及缺氧性腦損傷、癲癇、阿耳茨海默病、肌萎縮側(cè)索硬化、帕金森氏病等均與谷氨酸在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的堆積或過(guò)量釋放有關(guān)。外源性谷氨酸的神經(jīng)毒性在眾多的研究中得到證實(shí)。谷氨酸可以通過(guò)血-胎盤(pán)屏障而作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致胚胎下丘腦損毀等。幼年動(dòng)物的血腦屏障尚未發(fā)育完善，谷氨酸或谷氨酸單鈉引起急性神經(jīng)元變性和遲發(fā)性死亡，出現(xiàn)特征性的細(xì)胞病理學(xué)變化。隨著劑量的增加，損毀

3、可進(jìn)一步擴(kuò)展到腦室周邊結(jié)構(gòu)，專(zhuān)門(mén)破壞神經(jīng)元胞體而不損傷路過(guò)纖維，影響動(dòng)物的學(xué)習(xí)和記憶能力。 本文探討谷氨酸單鈉（MSG）對(duì)小鼠及其仔鼠的神經(jīng)毒性作用，以及SBH-2（復(fù)方注射液）對(duì)谷氨酸單鈉神經(jīng)毒性的保護(hù)作用。 方法： 成年小鼠實(shí)驗(yàn)：健康昆明品系8周齡小鼠300只，雌雄各半，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組再分為MSG處理組（MSG 2.0g／kg和4.0g／kg體重灌胃，連續(xù)10d）、藥物保護(hù)組1（2.0g／kg

4、體重MSG灌胃的同時(shí)，腹腔分別注射SBH-2 5g／kg、10g／kg、20g／kg體重，連續(xù)10d）、藥物保護(hù)組2（4.0g／kg體重MSG灌胃的同時(shí)，腹腔分別注射SBH-2 10g／kg、20g／kg、30g／kg體重，連續(xù)10d）、藥物對(duì)照組給予SBH-2（30g／kg），連續(xù)10d，對(duì)照組（連續(xù)lOd同體積生理鹽水灌胃）。 觀察小鼠及其子代的外觀體征變化：用形態(tài)學(xué)方法檢查小鼠腦部的病理組織學(xué)改變；Y迷宮實(shí)驗(yàn)、水迷宮實(shí)驗(yàn)檢

5、測(cè)小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力，自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠的興奮性，洞板實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠的探究好奇行為，爬繩實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠的高空協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)能力；另外，還進(jìn)行了體重和生殖能力的檢查。 同位素示蹤實(shí)驗(yàn)：健康昆明品系8周齡小鼠100只，雌雄各半，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組再分為DL-［2，3-<'3>H］Glu處理組（640kBq DL-［2，3-<'3>H］Glu／mouse+2.0g／kgMSG體重灌胃）、藥物保護(hù)組（640kBq DL-［2，3-

6、<'3>H］Glu／mouse+2.0g／kg體重MSG灌胃的同時(shí)，腹腔分別注射SBH-2 10g／kg、20g／kg、30g／kg體重），對(duì)照組給予SBH-2（30g／kg）。分別在給藥后30min、60min、90min、120min、180min時(shí)取腦，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組取4只。腦組織用預(yù)冷的PBS洗三遍，加1ml的SDS后，超聲波下破碎，取0.5ml腦組織破碎液加入5ml TdtonX-100甲苯閃爍液，搖勻，避光2h以上，用液閃儀

7、測(cè)定放射性強(qiáng)度，放射性測(cè)定數(shù)據(jù)按Poisson分布處理，以CPM／mg蛋白為單位。另取0.2ml腦組織破碎液用于蛋白定量，蛋白定量采用Lowry's方法。另取健康昆明品系8周齡小鼠100只，SBH-2使用純度大于98％的純品（SBH-2a），方法同上，測(cè)定小鼠腦中的CPM／mg值。 結(jié)果： 1．不同劑量MSG（2.0g／kg體重、4.0g／kg體重）灌胃后，MSG（2.0g／kg體重、4.0g／kg體重）組小鼠都出現(xiàn)：毛

8、色差，蓬松無(wú)光澤，活動(dòng)增多，好斗；MSG（2.0g／kg體重）灌胃的同時(shí)給予保護(hù)藥物（SBH-2），隨SBH-2劑量的增加小鼠及其仔鼠異常現(xiàn)象明顯減輕。 2．不同劑量MSG（2.0g／kg體重、4.0g／kg體重）灌胃后，病理組織學(xué)檢查顯示，2.0g／kg劑量組海馬區(qū)增生或明顯增生；4.0g／kg劑量組大腦皮質(zhì)局部或普遍明顯增生，海馬區(qū)增生或明顯增生，水腫，空泡變性，甚至壞死。MSG（2.0g／kg和4.0g／kg體重）灌胃的同

9、時(shí)給予SBH-2，隨SBH-2劑量的增加小鼠的腦部損傷明顯減輕，海馬區(qū)輕度增生和壞死，其他腦區(qū)均接近正常對(duì)照組。 3．MSG（2.0g／kg體重、4.0g／kg體重）灌胃，小鼠及其仔鼠的Y迷宮和水迷宮學(xué)習(xí)和記憶成績(jī)明顯下降；MSG（2.0g／kg體重）灌胃的同時(shí)給予SBH-2，SBH-2幾乎完全抵消MSG對(duì)小鼠及其仔鼠的Y迷宮和水迷宮學(xué)習(xí)和記憶能力的影響。 4．MSG（2.0g／kg體重、4.0g／kg體重）灌胃，小鼠及

10、其仔鼠的自主活動(dòng)次數(shù)明顯增加；MSG（2.0g／kg體重）灌胃的同時(shí)給予SBH-2，SBH-2能明顯減少小鼠及其仔鼠的自主活動(dòng)。 5．MSG（2.0g／kg體重、4.0g／kg體重）灌胃，小鼠及其仔鼠的探洞次數(shù)明顯減少；MSG（2.0g／kg體重、4.0g／kg體重）灌胃的同時(shí)給予SBH-2，隨SBH-2劑量的增加小鼠及其仔鼠的探洞次數(shù)接近正常對(duì)照組。 6．MSG（2.0g／kg體重、4.0g／kg體重）灌胃，小鼠及其仔

11、鼠“不會(huì)爬繩或掉下地”者明顯增多；MSG（2.0g／kg體重）灌胃的同時(shí)給予SBH-2，隨SBH-2劑量的增加小鼠及其仔鼠大多能自如地爬繩，與正常對(duì)照組小鼠接近。 7．不同劑量MSG（2.0g／kg體重、4.0g／kg體重）灌胃后，對(duì)小鼠及其仔鼠的體重均沒(méi)有明顯影響（資料未顯示）。 8．不同劑量MSG（2.0g／kg體重、4.0g／kg體重）灌胃后，對(duì)子代2小鼠沒(méi)有明顯影響（資料未顯示）。（本論文后面提到的仔鼠都指子代1

12、） 9．DL-［2,3-<'3>H］Glu應(yīng)用后60min,～90rain時(shí)在腦組織中含量最高，隨時(shí)間的延長(zhǎng)外源性谷氨酸含量緩慢降低；SBH-2能夠減輕大量外源MSG對(duì)小鼠腦的損傷。 結(jié)論： 1．MSG可明顯劑量依賴(lài)性地導(dǎo)致小鼠及其仔鼠出現(xiàn)中毒癥狀及體征；SBH-2可減輕中毒癥狀及體征。 2．MSG可明顯導(dǎo)致小鼠腦部損傷；SBH-2對(duì)MSG導(dǎo)致小鼠腦部損傷有明顯的保護(hù)作用。 3．MSG可明顯損傷小

13、鼠及其仔鼠的Y迷宮和水迷宮學(xué)習(xí)和記憶能力；興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)；抑制探究好奇行為；損傷高空協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)能力。SBH-2能幾乎完全抵消MSG對(duì)小鼠及其仔鼠Y迷宮、水迷宮學(xué)習(xí)和記憶能力的損傷作用；逆轉(zhuǎn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)過(guò)度興奮；改善對(duì)探究好奇行為的抑制和對(duì)高空協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)能力的損傷。 4．SBH-2能夠顯著降低DL-［2，3-<`3>H］Glu在腦組織中的含量。 5．SBH-2a系從SBH-2中分離純化的單體成分,SBH-2a能顯著減少M(fèi)SG