SBH-Ⅰ對(duì)妊娠晚期谷氨酸單鈉所致發(fā)育中胎腦興奮性毒性的保護(hù)作用.pdf

1、谷氨酸(Glutamate，Glu)是人及哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)興奮性神經(jīng)遞質(zhì)中最重要的氨基酸。過量的谷氨酸對(duì)神經(jīng)元有損傷作用，即興奮性毒性(Excitotoxicity)。大量研究已證實(shí)多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病如缺血及缺氧性腦損傷、癲癇、阿耳茨海默病、肌萎縮側(cè)索硬化、帕金森氏病等均與谷氨酸在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的堆積或過量釋放有關(guān)。目前對(duì)這些神經(jīng)系統(tǒng)疾病還沒有比較令人滿意的治療藥品。 SBH-I是本實(shí)驗(yàn)室從海洋生物中提取的一種活性物質(zhì)。前期的工

2、作已初步證實(shí)SBH-I具有一定抵抗小鼠神經(jīng)毒性的作用。基于上述背景，本文研究SBH-I對(duì)小鼠妊娠晚期谷氨酸單鈉所致子代神經(jīng)毒性的保護(hù)作用并探索其作用機(jī)理。 方法： 1.谷氨酸單鈉(MSG)對(duì)成年小鼠的半致死量LD<,50>的測(cè)定。 2.小鼠妊娠晚期給藥，其所產(chǎn)子代小鼠通過行為學(xué)、病理形態(tài)學(xué)等實(shí)驗(yàn)觀察其行為學(xué)、病理組織形態(tài)學(xué)上的變化。 3.對(duì)子代小鼠稱量體重和飼料消耗量，觀察藥物對(duì)這兩指標(biāo)的影響情況。

3、 4.子代小鼠成年后進(jìn)行配對(duì)，觀察其繁殖能力和子代II小鼠受影響的情況。 5.[<'3>H]-Glu示蹤實(shí)驗(yàn)觀察SBH-I對(duì)谷氨酸單鈉(MSG)在妊娠母鼠和胎鼠腦中的分布的影響。 6.蛋白免疫印跡法檢測(cè)小鼠腦中蛋白Bcl-2、Caspases-3的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.谷氨酸單鈉(MSG)對(duì)昆明系成年小鼠的半致死量LD<,50>，灌喂方式給藥的LD<,50>為50.07±5.43g/kg，腹腔注射給藥

4、LD<,50>為4.53±0.37g/kg。 2.小鼠妊娠晚期MSG(20g/kg體重、40g/kg體重)灌胃，其所產(chǎn)子代小鼠的Y迷宮和水迷宮學(xué)習(xí)記憶成績明顯下降；MSG(2.0g/kg體重)灌胃的同時(shí)給予SBH-I能一定程度上抵消MSG對(duì)小鼠的Y迷宮和水迷宮學(xué)習(xí)記憶能力的影響。 3.小鼠妊娠晚期MSG灌胃，其所產(chǎn)子代小鼠30日齡時(shí)自主活動(dòng)次數(shù)明顯增加，而探洞次數(shù)明顯減少；MSG灌胃的同時(shí)給予SBH-I能使子代小鼠的自主

5、活動(dòng)和探究好奇行為接近正常對(duì)照組。 4.小鼠妊娠晚期MSG灌胃，其所產(chǎn)子代小鼠不會(huì)爬繩者及掉下次數(shù)明顯增多；MSG灌胃的同時(shí)給予SBH-I組的小鼠能自如地爬繩，與對(duì)照組小鼠接近。 5．小鼠妊娠晚期MSG灌胃，其所產(chǎn)子代小鼠腦病理組織學(xué)檢查顯示，海馬區(qū)受損，神經(jīng)細(xì)胞丟失明顯；MSG灌胃的同時(shí)給予SBH-I，腦海馬區(qū)損傷明顯減輕。 6．母鼠妊娠晚期一次性灌胃給予MSG，對(duì)其子代小鼠體重、飼料消耗量及成年后的生殖能力無

6、明顯影響。 7．母鼠妊娠晚期一次性灌胃給予MSG，其所產(chǎn)生的毒性在子代Ⅱ小鼠已不明顯。 8．[<'3>H]-GIu示蹤實(shí)驗(yàn)顯示，給藥后腦中的[<'3>H]-GIu的含量隨時(shí)程變化而不斷變化，在90min時(shí)，腦中含量達(dá)到最高峰；胎鼠與母鼠腦中的[<'3>H]-Glu含量升降趨勢(shì)一致，但胎鼠的含量要稍高于母鼠。MSG灌胃的同時(shí)給予SBH-I，能明顯降低腦中[<'3>H]-Glu含量。 9．蛋白免疫印跡法檢測(cè)顯示：與對(duì)

7、照組相比，小鼠妊娠晚期MSG灌胃，其所產(chǎn)子代小鼠在出生后24小時(shí)內(nèi)腦中蛋白Bcl-2表達(dá)明顯減少、而Caspase-3表達(dá)上升。而MSG灌胃的同時(shí)給予SBH-I，其所產(chǎn)子代小鼠腦中蛋白Bcl-2、Caspase-3的表達(dá)均比較接近正常水平。 結(jié)論： 1．小鼠妊娠晚期一次性大劑量口服灌胃MSG可造成所產(chǎn)子代小鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降，探究好奇行為受抑制，中樞神經(jīng)系統(tǒng)過度興奮，高空運(yùn)動(dòng)能力不協(xié)調(diào)；SBH-I可一定程度上逆轉(zhuǎn)這些行為

8、學(xué)變化。 2．小鼠妊娠晚期一次性大劑量口服灌胃MSG，對(duì)其所產(chǎn)子代小鼠的體重與飼料消耗量無影響；對(duì)子代Ⅱ小鼠也無明顯影響。 3．MSG可明顯劑量依賴性地導(dǎo)致妊娠晚期小鼠所產(chǎn)子代小鼠大腦海馬區(qū)損傷；SBH．I對(duì)MSG導(dǎo)致小鼠大腦海馬區(qū)損傷有明顯的保護(hù)作用。 4．SBH-I對(duì)谷氨酸單鈉所致神經(jīng)毒性的保護(hù)作用可能是通過抑制腦組織對(duì)過量MSG的攝取，并通過調(diào)節(jié)神經(jīng)元相關(guān)基因的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表