神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和神經(jīng)損傷保護(hù)活性物質(zhì)篩選研究.pdf

1、目的：構(gòu)建有效便捷的細(xì)胞模型篩選具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和(或)神經(jīng)損傷保護(hù)的活性物質(zhì)。利用所建模型對(duì)部分貴州中藥及民族藥粗提物及化合物進(jìn)行神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和神經(jīng)損傷保護(hù)活性篩選，尋找具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和(或)神經(jīng)損傷保護(hù)的活性物質(zhì)，為進(jìn)一步開(kāi)展對(duì)貴州中藥及民族藥進(jìn)行神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和神經(jīng)損傷保護(hù)活性物質(zhì)研究提供方法學(xué)保障和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。 研究方法：大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(rat pheochromocytoma cells, PC12)具有較高的穩(wěn)定性和同質(zhì)性，

2、分化程度高，對(duì)神經(jīng)生長(zhǎng)因子(Nerve Growth Factor，NGF)有較強(qiáng)的反應(yīng)，生長(zhǎng)出神經(jīng)突起，被廣泛應(yīng)用于有關(guān)神經(jīng)細(xì)胞分化和功能的各種研究。本工作利用PC12以上特點(diǎn)構(gòu)建以下細(xì)胞模型1)促神經(jīng)細(xì)胞分化小分子活性物質(zhì)的篩選模型，2)抗過(guò)氧化氫損傷PC12細(xì)胞模型，3)抗β-淀粉肽損傷PC12細(xì)胞模型，4)抗谷氨酸損傷PC12細(xì)胞模型。通過(guò)考察不同的細(xì)胞密度、損傷物質(zhì)的濃度、及損傷物質(zhì)的作用時(shí)間等方面對(duì)PC12細(xì)胞的影響，選擇合

3、適的實(shí)驗(yàn)條件。通過(guò)對(duì)模型條件的優(yōu)化為開(kāi)展大規(guī)模樣品篩選提供簡(jiǎn)便有效的方法。篩選實(shí)驗(yàn)前先通過(guò)MTT法評(píng)價(jià)各樣品在預(yù)設(shè)濃度下對(duì)PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制程度，再通過(guò)過(guò)氧化氫、β-淀粉肽、谷氨酸致PC12細(xì)胞損傷模型評(píng)價(jià)樣品對(duì)過(guò)氧化氫、β-淀粉肽、谷氨酸損傷的抑制作用，有利于對(duì)樣品的活性作出全面、客觀、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)及篩選出有效低毒的活性物質(zhì)。 結(jié)果：本工作成功復(fù)制促神經(jīng)細(xì)胞分化小分子活性物質(zhì)的篩選模型、抗過(guò)氧化氫損傷PC12細(xì)胞模型、抗β-

4、淀粉肽損傷PC12細(xì)胞模型、抗谷氨酸損傷PC12細(xì)胞模型。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化確定了模型條件。利用所建模型對(duì)314個(gè)樣品進(jìn)行了促神經(jīng)細(xì)胞分化活性篩選，篩選出37個(gè)活性樣品；對(duì)205個(gè)樣品進(jìn)行了 抗過(guò)氧化氫損傷PC12細(xì)胞活性篩選，篩選出149個(gè)活性樣品；對(duì)35個(gè)樣品進(jìn)行了抗β-淀粉肽損傷PC12細(xì)胞活性篩選，篩選出17個(gè)活性樣品；對(duì)34個(gè)樣品進(jìn)行了抗谷氨酸損傷PC12細(xì)胞活性篩選，篩選出27個(gè)活性樣品。 結(jié)論：所構(gòu)建模型