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文檔簡介
1、目的:
本文主要以新鮮的近江牡蠣全臟器為原料,酶解提取近江牡蠣糖胺聚糖(Crassostrea Rivularis glycosaminoglycan),進(jìn)行其體內(nèi)抗腫瘤活性、安全毒理學(xué)評(píng)價(jià),以及牡蠣多糖口服液的研究。
方法:
1.體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)方法:采用動(dòng)物體內(nèi)移植性腫瘤篩選抗腫瘤藥物的方法,選用S180肉瘤、艾氏癌腹水型(EAC)、L1210小鼠白血病三種瘤株,觀察近江牡蠣糖胺聚糖對(duì)KM小鼠體內(nèi)三種腫瘤
2、細(xì)胞的影響作用。
2.安全毒理學(xué)評(píng)價(jià):
?、偌毙远拘栽囼?yàn):按照最大耐受劑量法,設(shè)定CG的劑量為21.50 g/kg?BW,灌胃于KM小鼠后,連續(xù)觀察14 d,記錄中毒癥狀和死亡情況。②Ames試驗(yàn):采用組氨酸營養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏菌四種菌株TA97、TA98、TA100、TA102進(jìn)行試驗(yàn),設(shè)5個(gè)劑量組即5000、1000、200、40、8μg/皿,統(tǒng)計(jì)各組回復(fù)突變菌落數(shù)。③小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn):設(shè)置劑量為10、5、2
3、.5 g?kg-1,計(jì)數(shù)每只動(dòng)物中1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞,記錄含微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù),觀察200個(gè)細(xì)胞中嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞(PCE/RBC)比值。④小鼠精子畸形試驗(yàn):試驗(yàn)劑量10、5、2.5 g?kg-1,每只小鼠計(jì)數(shù)1000個(gè)精子,記錄畸形精子的數(shù)量。
3.近江牡蠣多糖口服液的研制方法:①采用蜂蜜、檸檬酸作為甜味劑和酸味劑,利用酵母粉發(fā)酵除腥,設(shè)計(jì)正交試驗(yàn),研究蜂蜜、檸檬酸、牡蠣多糖添加量三個(gè)因素對(duì)口服液口感的影響。②
4、口服液相關(guān)指標(biāo)的檢測:利用阿利新藍(lán)比色法測定糖胺聚糖的含量;利用《中華人民共和國藥典》2010版規(guī)定進(jìn)行裝量檢查;按照《中國藥典》2010年版二部附錄VI H pH值測定法測定pH;參照2003版《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》測定重金屬和微生物的含量。
結(jié)果:
1.體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn):
?。?)對(duì)荷 S180實(shí)體瘤小鼠的影響:①CG三個(gè)劑量組(50 mg/kg、100mg/kg、200mg/kg)與陰性對(duì)照組相比
5、,均能降低小鼠的實(shí)體瘤重量。其中CG100mg/kg劑量組差異極顯著(P<0.01),抑瘤率最高達(dá)到44.66%;CG200mg/kg差異顯著(P<0.05)。CG100mg/kg能協(xié)同增強(qiáng)CTX的抑瘤效果。②對(duì)小鼠免疫器官的影響:CG各劑量組均能增加小鼠的脾指數(shù),CG50mg/kg、100mg/kg劑量組能增加小鼠的胸腺指數(shù),各劑量組與陰性對(duì)照組相比,無顯著差異(P<0.05);其中CG100mg/kg能拮抗CTX引起的脾指數(shù)和胸腺指
6、數(shù)降低,修復(fù)CTX造成的免疫損傷。
?。?)對(duì)荷白血病L1210腹水瘤小鼠的影響:CG各劑量組均能延長荷瘤小鼠的平均生命期,其中CG100mg/kg生命延長率最高達(dá)到12.45%;其中CG100mg/kg對(duì)CTX起到協(xié)同增敏作用,將小鼠的生命延長率從30.75%提高到50.27%。腹圍測定的結(jié)果顯示,CG各劑量組小鼠的腹圍均少于陰性對(duì)照組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,結(jié)果與生命延長率相比較有一定的相關(guān)性。
?。?)對(duì)荷艾氏腹水癌EA
7、C小鼠的影響:CG各劑量組均能延長荷瘤小鼠的平均生命期,且隨劑量的增加其生命延長率也在增加,CG200mg/kg生命延長率最高達(dá)到18.66%;與生理鹽水對(duì)照組比較,CG(100mg/kg、200mg/kg)差異顯著(P<0.05);合用組體現(xiàn)了協(xié)同增敏作用,將小鼠的生命延長率從47.92%提高到55.27%。腹圍測定的結(jié)果顯示,各用藥組小鼠腹圍均少于生理鹽水對(duì)照組。
2.安全毒理學(xué)試驗(yàn):
?。?)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明
8、,試驗(yàn)期間未觀察到小鼠的死亡及中毒癥狀,經(jīng)口最大耐受劑量大于21.50 g/kg?BW。
?。?)Ames試驗(yàn)的結(jié)果表明,CG無致突變作用;小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)的結(jié)果表明,CG對(duì)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核形成率無顯著影響;小鼠精子畸形試驗(yàn)的結(jié)果表明,CG對(duì)小鼠精子畸形率無顯著影響。三項(xiàng)遺傳毒理學(xué)的試驗(yàn)結(jié)果皆呈陰性,表明近江牡蠣糖胺聚糖無明顯遺傳毒性。
3.近江牡蠣多糖口服液的研制:①通過正交試驗(yàn)優(yōu)化,確定最佳口感配方為酵母粉
9、(2%,30 min),牡蠣多糖添加量5 mg/mL,7%蜂蜜,0.15%檸檬酸;②口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):澄清透明的淺黃色、黃色液體,無腥味、有香甜味,較適口、酸甜適中,口感圓滑,糖胺聚糖濃度398μg/mL,pH4.5~5.5,鎘(以Cd計(jì))≤0.2 mg/L,鉛(以Pb計(jì))≤0.2 mg/L,菌落總數(shù)≤100 CFU/mL,大腸菌群≤3 CFU/mL。
結(jié)論:
?。?)近江牡蠣糖胺聚糖對(duì)S180肉瘤、艾氏癌腹水型(EA
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