近江牡蠣糖原提取、純化及化學(xué)結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、牡蠣（Oyster），俗稱蠔、海蠣子、蠣黃，屬牡蠣科，雙殼類軟體動物，是我國重要海洋貝類，其分布廣泛，資源豐富。牡蠣肉肥味美，營養(yǎng)豐富，富含蛋白質(zhì)、糖原、氨基酸、維生素及微量元素。研究表明，牡蠣糖原具有解酒保肝、抗癌等生理活性，但其化學(xué)結(jié)構(gòu)尚不清楚。本論文以近江牡蠣為原料，對牡蠣糖原進(jìn)行提取制備，分離純化，并對純化的牡蠣糖原組分進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)分析，為牡蠣糖原構(gòu)效關(guān)系的研究提供理論依據(jù)。主要研究的內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　1.牡蠣糖原提取

2、工藝優(yōu)化
　　采用水提法、堿提法和酶提法分別提取牡蠣糖原，試驗結(jié)果表明，堿提法的提取率最高（90.14％）。對堿提法進(jìn)行了工藝優(yōu)化。選擇KOH濃度、提取溫度、提取時間三個因素分別進(jìn)行單因素試驗。在單因素試驗基礎(chǔ)上，進(jìn)行三因素三水平的正交試驗，各因素對牡蠣糖原提取率的影響主次順序為：溫度>KOH濃度>時間，對試驗組合進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳提取條件：KOH濃度30%、溫度90℃，時間120 min，此時，糖原提取率為92.45%，得率為4

3、.55%。
　　采用Sevag法除蛋白。牡蠣糖原提取液經(jīng)5次脫蛋白后，蛋白去除率達(dá)到91.6%，經(jīng)紫外掃描，在280nm處無特征吸收峰。綜合考慮除蛋白效果和經(jīng)濟(jì)性，選擇5次作為除蛋白的最佳次數(shù)。
　　選用最佳工藝條件提取牡蠣糖原液，經(jīng)脫色、Sevag法除蛋白、乙醇沉淀、透析和冷凍干燥的方法制得牡蠣糖原粗品OG，其總糖含量為80.72%，蛋白質(zhì)含量為1.96%，脂肪僅為0.16%。
　　2.牡蠣糖原分離純化
　　采

4、用DEAE-52纖維素陰離子交換柱層析對牡蠣糖原粗品OG進(jìn)行分級純化，依次用蒸餾水，0.1 mol/L、0.2 mol/L、0.3 mol/L、0.4 mol/L和0.5 mol/L的NaCl溶液洗脫，分別得到OG0、OG1、OG2、OG3、OG4和OG5六個糖組分。再利用Sepharose2B凝膠柱層析對得率較高的OG0、OG1和OG2組分進(jìn)行分離，得到OG0-1、OG1-1和OG2-1三個組分。采用高效凝膠滲透色譜法證明OG0-1、

5、OG1-1和OG2-1三者均為單一的牡蠣多糖組分。
　　3.牡蠣多糖基本理化性質(zhì)
　　采用苯酚-硫酸法、Folin-酚法分別對 OG0-1、OG1-1、OG2-1中總糖和蛋白質(zhì)含量進(jìn)行分析，結(jié)果表明，OG0-1、OG1-1和 OG2-1的總糖含量分別為94.45%、97.82%、86.68%；蛋白質(zhì)含量分別為0.61%、0.55%、1.24%。采用氣相色譜法對OG0-1、OG1-1和OG2-1進(jìn)行構(gòu)成糖分析，結(jié)果顯示，OG0

6、-1由鼠李糖和甘露糖組成，其摩爾百分比分別為90.05%和8.71%；OG1-1僅由一種單糖葡萄糖組成；OG2-1由四種單糖組成，鼠李糖、巖藻糖、木糖、半乳糖的摩爾百分比分別為57.47%、4.06%、12.11%、22.56%。以T系列標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖作為分子量標(biāo)準(zhǔn)品，采用高效凝膠滲透色譜法測定OG0-1、OG1-1、OG2-1的相對分子質(zhì)量，結(jié)果表明，OG0-1、OG1-1、OG2-1的相對分子質(zhì)量分別為166萬、227萬和233萬Da。

7、
　　4.牡蠣多糖組分由三個單一的純化組分組成，OG1-1是糖原。OG0-1和OG2-1可能是以鼠李糖為主鏈的螺旋藻多糖，這是由于牡蠣進(jìn)食海藻，在體內(nèi)蓄積的藻類多糖。
　　5.牡蠣糖原組分OG1-1化學(xué)結(jié)構(gòu)分析
　　對牡蠣糖原組分OG1-1進(jìn)行紅外光譜分析，結(jié)果顯示OG1-1具有多糖類物質(zhì)的特征吸收。在862 cm-1處出現(xiàn)吡喃糖環(huán)α型的C-H變角振動吸收峰，說明存在α型糖苷鍵。經(jīng)過核磁共振波譜分析，表明OG1-1存在