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文檔簡介
1、目的:1.以乙醇和/或鐵染毒小鼠為研究對象,探討酒精性肝鐵過載時肝臟氧化損傷程度的變化,以及槲皮素的保護作用。2.初步探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否參與酒精和/或鐵染毒小鼠肝鐵過載時鐵調(diào)素(hepcidin)的調(diào)控,以及槲皮素的拮抗作用。
方法:120只小鼠按體重隨機分為8組,分別為正常對照組、酒精對照組、槲皮素對照組、槲皮素+酒精組、高鐵對照組、酒精+高鐵組、槲皮素+高鐵組、槲皮素+酒精+高鐵組。小鼠能量配對喂養(yǎng)15周建立酒精性肝鐵過載
2、模型后,隔夜停食,次日稱重后處死取血,分離血清分析其ALT、AST水平;迅速剝離肝臟稱重,計算肝臟體重比;取0.5g大葉肝樣以原子吸收分光光度法測定肝臟中總鐵水平;DHE探針孵育熒光顯微鏡分析其ROS水平。實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-timePCR)檢測各組小鼠肝臟組織中鐵調(diào)素(hepcidin)、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucoseregulatedprotein78,GRP78)、X盒結(jié)合蛋白1(XBP1)mRNA表達水平;免疫印
3、記法(WesternBlot)測定各組小鼠GRP78、XBPS/XBPU蛋白表達情況。
結(jié)果:
1.能量配對喂養(yǎng)15周后,各酒精組小鼠體重輕于各非酒精組小鼠,高鐵和槲皮素對小鼠體重沒有影響;
2.與正常對照組相比,酒精與鐵單獨染毒后小鼠肝臟體重比、血清ALT和AST上升;酒精和鐵的聯(lián)合染毒組肝臟體重比進一步增加,血清ALT和AST水平升高更為明顯;與相應(yīng)對照組相比,槲皮素可以明顯降低酒精和/或鐵單獨或者聯(lián)合
4、作用引起的肝臟體重比上升,及血清ALT、AST水平。
3.酒精、鐵單獨均可導(dǎo)致肝臟總鐵含量和ROS水平升高,二者聯(lián)合染毒后肝臟總鐵含量和ROS水平增加更為顯著;槲皮素干預(yù)可減輕酒精和/或鐵染毒所致的肝鐵沉積,降低其ROS水平,但槲皮素本身對肝臟總鐵和ROS水平?jīng)]有影響。
4.HepcidinmRNA表達:長期酒精攝入降低了肝臟中hepcidinmRNA水平,但高鐵染毒則明顯升高其表達水平,兩者聯(lián)合作用后肝hepcid
5、inmRNA的表達低于高鐵對照組,但仍高于正常對照組;槲皮素干預(yù)抑制了酒精對hepcidin下調(diào)及鐵對hepcidin的誘導(dǎo)。
5.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;長期酒精尤其是鐵染毒后小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標志XBPS/XBPTmRNA和GRP78的mRNA和蛋白表達水平升高,聯(lián)合染毒后應(yīng)激更為明顯;槲皮素干預(yù)抑制了酒精尤其是鐵誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,對聯(lián)合染毒小鼠也有明顯的抑制作用。
結(jié)論:槲皮素對酒精與鐵單獨或者聯(lián)合染毒小鼠的肝臟氧化損傷及鐵沉
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