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1、目的:
二氫槲皮素是一種黃酮類化合物,據(jù)前期研究發(fā)現(xiàn)二氫槲皮素有很強(qiáng)的抗氧化作用,具有很高的潛力。本研究通過(guò)狂飲酒精性脂肪肝模型和急性酒精性脂肪肝模型,探討二氫槲皮素是否對(duì)酒精性脂肪肝小鼠有抑制脂肪蓄積的作用。
方法:
1.狂飲酒精性脂肪肝小鼠模型的體內(nèi)實(shí)驗(yàn):給藥低中高劑量組每天給予不同濃度的二氫槲皮素(1mg/kg、5mg/kg、25mg/kg)共5天,給藥第5天時(shí)給藥4小時(shí)候每隔30分鐘給予33%酒精共
2、3次。用試劑盒檢測(cè)血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和甘油三酯(TG)水平和肝組織中的甘油三酯(TG)的水平,通過(guò)HE染色和免疫組織化學(xué)染色方法觀察二氫槲皮素對(duì)小鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)變化的影響。
2.急性酒精性脂肪肝小鼠模型的體內(nèi)實(shí)驗(yàn):酒精組隔12小時(shí)給予33%酒精(5g/kg)共3次,給藥低中高劑量組每隔12小時(shí)同時(shí)給予二氫槲皮素(1mg/kg、5mg/kg、25mg/kg)和酒精共3次。用試劑盒檢測(cè)血清中谷草轉(zhuǎn)氨
3、酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和甘油三酯(TG)水平和肝組織中的甘油三酯(TG)的水平,通過(guò)HE染色和免疫組織化學(xué)染色方法觀察二氫槲皮素對(duì)小鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)變化的影響;通過(guò)蛋白印跡觀察小鼠肝臟LKB1、乙酰輔酶a羧化酶(Acetyl CoACarboxylase,ACC)、AMP依賴的蛋白激酶α(AMP-activated Kinaseα,AMPKα)等脂肪合成與氧化相關(guān)因子及炎癥小體相關(guān)因子表達(dá)變化。
3.急性酒精性脂肪
4、肝體外實(shí)驗(yàn):HepG2細(xì)胞給予不同濃度的二氫槲皮素,間隔1小時(shí)后給予大劑量酒精誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷,24小時(shí)后刮蛋白做蛋白印跡實(shí)驗(yàn),檢測(cè)AMPKα、ACC、IL-1β的表達(dá);HepG2細(xì)胞敲除P2x7R,間隔30小時(shí)后給予二氫槲皮素和酒精,24小時(shí)后通過(guò)熒光染色觀察SREBP-1的表達(dá);LPS+ATP刺激肝癌細(xì)胞株HepG2,并通過(guò)Western Blot檢測(cè)、HepG2胞內(nèi)P2x7R和pro-IL-1β活化片段。
結(jié)果:
5、 1.狂飲酒精性脂肪肝小鼠模型中,二氫槲皮素組能夠明顯降低小鼠血清及肝臟組織中TG的含量,減少血清中ALT、AST的含量;HE染色和免疫組化結(jié)果表明二氫槲皮素能明顯減輕酒精引起的肝臟脂肪變性。
2.急性酒精性脂肪肝小鼠模型中,二氫槲皮素組能夠明顯降低小鼠血清及肝臟組織中TG的含量,減少血清中ALT、AST的含量;HE染色和免疫組化結(jié)果表明二氫槲皮素能明顯減輕酒精引起的肝臟脂肪變性;二氫槲皮素明顯減少了P2x7R、Caspase
6、-1及NLRP3炎癥小體的陽(yáng)性表達(dá),減少了巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的炎性募集。同時(shí)二氫槲皮素能夠活化AMPKα、SIRT-1,抑制ACC和SREBP-1的表達(dá)。
3.體外實(shí)驗(yàn)中二氫槲皮素明顯抑制了酒精誘導(dǎo)的肝細(xì)胞中ACC、IL-1β的表達(dá),同時(shí)激活了AMPKα、LKB1。
結(jié)論:
本實(shí)驗(yàn)證明二氫槲皮素對(duì)狂飲酒精性脂肪肝小鼠和急性酒精性脂肪肝小鼠肝臟脂肪積蓄有一定的保護(hù)作用,同時(shí)對(duì)脂肪肝伴有的炎癥也有一定的抑制作
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