骨髓間接Coombs實(shí)驗(yàn)方法的應(yīng)用及其對(duì)免疫相關(guān)性血細(xì)胞減少癥患者的臨床診斷意義.pdf

1、目的：本研究旨在應(yīng)用骨髓間接Coombs實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)免疫相關(guān)性全血細(xì)胞減少癥(Immuno-related Pancytopenia，IRP)患者骨髓上清液中存在的自身抗體，并探討其對(duì)患者的臨床診斷意義。
　　方法：
　　1.研究對(duì)象為30例全血細(xì)胞減少患者(免疫相關(guān)性全血細(xì)胞減少癥IRP22例，意義未明血細(xì)胞減少患者ICUS8例)及正常對(duì)照者15名。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FACS)檢測(cè)骨髓造血細(xì)胞(CD15+、GIyCoA+和C

2、D34+細(xì)胞)膜表面抗體陽性率(IgM或IgG)。
　　2.實(shí)驗(yàn)組選取30例全血的骨髓上清液分別和15名正常對(duì)照者骨髓有核細(xì)胞(Bone marrow nucleated cell，BMNC)、在37℃、5％CO2孵育箱完全飽和濕度下孵育45分鐘，對(duì)照組選取15名正常人骨髓有核細(xì)胞與自身骨髓上清液在相同條件下孵育。應(yīng)用FACS檢測(cè)孵育45min后骨髓造血細(xì)胞(CD15+、GlyCoA+和CD34+細(xì)胞)膜表面抗體陽性率，并分析抗體

3、陽性率與患者白細(xì)胞(WBC)、血紅蛋白(HB)水平、網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率(RET％)、骨髓紅系/粒系比例及樹突細(xì)胞亞群比例(DC1/DC2)、CD5+B細(xì)胞比例和間接膽紅素(IBIL)水平的相關(guān)性。
　　3.上述30例全血細(xì)胞減少患者的骨髓上清液與自身BMNC、對(duì)照組選取正常人的骨髓上清液與上述30例患者的BMNC，對(duì)照組選取正常對(duì)照者骨髓上清液與這30例患者的骨髓有核細(xì)胞，在上述條件下孵育45min，應(yīng)用FACS檢測(cè)BMNC(CD1

4、5+、GlyCoA+和CD34+細(xì)胞)膜表面抗體陽性率，并分析抗體陽性率與上述各臨床指標(biāo)的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.30例患者中，孵育前直接Coombs實(shí)驗(yàn)陽性者共16例，陰性者14例，15名正常人直接Coombs實(shí)驗(yàn)陰性；
　　2.30例患者中，間接Coombs實(shí)驗(yàn)陽性者共16例，總陽性率53.33％(16/30)；直接Coombs實(shí)驗(yàn)陽性的16例中，12例間接Coombs實(shí)驗(yàn)陽性，陽性率為75％(12/16)；

5、ICUS中有4例間接庫姆實(shí)驗(yàn)陽性，陽性率50％(4/8)
　?、賹?shí)驗(yàn)組CD15+cells表面IgG陽性率為0.34％，顯著高于對(duì)照組0.20％(P<0.05)；
　?、趯?shí)驗(yàn)組CD15+cells表面IgM陽性率為0.34％，顯著高于對(duì)照組0.23％(P<0.05)：
　?、蹖?shí)驗(yàn)組GlyCoA+cells表面IgG陽性率為(0.83±0.75)％，顯著高于對(duì)照組(0.47±0.43)％(P<0.05)；
　?、軐?shí)

6、驗(yàn)組GlyCoA+cells表面IgM陽性率為(2.12±1.98)％，顯著高于對(duì)照組(0.68±0.64)％(P<0.01)；
　?、輰?shí)驗(yàn)組CD34+cells表面IgG陽性率為0.64％，顯著高于對(duì)照組0.00％(P<0.05)：
　?、迣?shí)驗(yàn)組CD34+cells表面IgM陽性率為0.21％，顯著高于對(duì)照組0.00％(P<0.05)；
　?、逤D15+cells表面IgG陽性率與CD5+B細(xì)胞比例呈顯著正相(r=0

7、.576，P=0.002)，與首次發(fā)病時(shí)白細(xì)胞數(shù)量、骨髓粒系比例、DC亞群水平等臨床指標(biāo)均沒有相關(guān)性；
　?、郈D15+cells表面IgM陽性率與CD5+B細(xì)胞比例呈顯著正相關(guān)(r=0.412，P=0.037)，與首次發(fā)病時(shí)白細(xì)胞數(shù)量、骨髓粒系比例、DC亞群水平等臨床指標(biāo)均沒有相關(guān)性；
　?、酖lyCoA+cells表面IgG陽性率與患者入院Hb水平(r=-0.549，P=0.002)、RET％(r=-0.475，P=0.

8、009)、骨髓紅系比例(r=-0.475，P=0.014)、DC1/DC2(r=-0.421，P=0.03)呈明顯負(fù)相關(guān)，與IBIL(r=0.730，P=0.000)、CD5+B細(xì)胞比例呈顯著正相關(guān)(r=0.684，P=0.000)；
　　⑩GlyCoA+cells表面IgM陽性率與患者入院Hb(r=-0.488，P=0.010)、RET％(r=-0.399，P=0.029)、骨髓紅系比例(r=-0.5045，P=0.012)及D

9、C1/DC2(r=-0.661.P=0.001)呈顯著負(fù)相關(guān)，與間接膽紅素水平(r=0.430，P=0.018)、CD5+B細(xì)胞比例(r=0.841，P=0.000)呈顯著正相關(guān)。
　　2.30例患者孵育后骨髓膜抗體陽性者共18例，總陽性率60％(18/30)；在直接Coombs實(shí)驗(yàn)陰性的14例中，有12例患者自身骨髓上清液孵育后骨髓膜抗體陽性，陽性率為85.71％(12/14)，8例ICUS患者自身骨髓上清液孵育后，6例患者骨髓

10、膜抗體出現(xiàn)陽性，陽性率75％(6/8)。
　?、賹?shí)驗(yàn)組CD15+cells表面IgG陽性率為(2.72±3.24)％，顯著高于對(duì)照組(1.03±1.15)％(P<0.05)；
　?、趯?shí)驗(yàn)組CD15+cells表面IgM陽性率為(0.97±0.77)％，顯著高于對(duì)照組(0.41±0.69)％(P<0.05)；
　?、跥lyCoA+cells表面IgG陽性率為(3.80±6.82)％，，顯著高于對(duì)照組(0.95±1.05)

11、％(P<0.001)；
　?、蹽lyCoA+cells表面IgM陽性率為(3.14±1.78)％，顯著高于對(duì)照組(1.93±1.32)％(P<0.001)；
　　⑤ CD34+cells表面IgG陽性率為1.09％，顯著高于對(duì)照組0.00％(P<0.05)；
　?、轈D34+cells表面+IgM陽性率為1.44％，顯著高于對(duì)照組0.00％(P<0.05)。
　?、逤D15+cells表面IgG陽性率與CD5+B

12、細(xì)胞比例呈顯著正相關(guān)(r=0.685，P=0.000)、與DC亞群水平成顯著負(fù)相(r=-0.524，P=0.002)，與首次發(fā)病時(shí)白細(xì)胞數(shù)量、骨髓粒系比例等臨床指標(biāo)均沒有相關(guān)性；
　?、郈D15+cells表面IgM陽性率與CD5+B細(xì)胞比例呈顯著正相關(guān)(r=0.421，P=0.021)、與DC1/DC2亞群水平成顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.539，P=0.002)，與首次發(fā)病時(shí)白細(xì)胞數(shù)量、骨髓粒系比例等臨床指標(biāo)均沒有相關(guān)性；
　

13、?、酖lyCoA+cells表面IgG陽性率與患者入院Hb水平(r=-0.657，P=0.000)、骨髓紅系比例(r=-0.734，P=0.000)、DC1/DC2(r=-0.368，P=0.041)呈顯著負(fù)相關(guān)，與CD5+B細(xì)胞比例(r=0.541，P=0.002)、RET％(r=0.498，P=0.004)、IBIL水平(r=0.514，P=0.003)呈顯著正相關(guān)。
　?、釭lyCoA+cells表面IgM陽性率與患者入院H

14、b水平(r=-0.368，P=0.042)、骨髓紅系比例(r=-0.699，P=0.000)、DC1/DC2(r=-0.448，P=0.011)呈顯著負(fù)相關(guān)，與CD5+B細(xì)胞比例(r=0.383，P=0.033)、RET％(r=0.374，P=0.038)、IBIL水平呈顯著正相關(guān)(r=0.560，P=0.001)。
　　結(jié)論：部分IRP及ICUS患者可通過骨髓間接庫姆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到骨髓上清液中存在自身抗體(IgG或IgM)，其陽性率