東北梅花鹿茸生長期頂端組織差異表達(dá)基因的篩選和鑒定.pdf

1、鹿茸是哺乳動(dòng)物中惟一能夠再生的組織器官，因此鹿茸為哺乳動(dòng)物組織器官再生的研究提供了獨(dú)特的模型。研究已表明鹿茸發(fā)育屬軟骨內(nèi)成骨，其再生基于干細(xì)胞而不涉及細(xì)胞的去分化;在鹿茸生長過程中，細(xì)胞的分化、增殖、凋亡都受到特定基因的表達(dá)調(diào)控;但其再生及其生長發(fā)育的分子機(jī)制迄今還并不十分清楚。
　　本試驗(yàn)采用mRNA差異顯示PCR技術(shù)篩選東北梅花鹿茸生長過程中小鞍子(前期）、二杠茸（中期）和三杈茸（后期）頂端間充質(zhì)組織的差異表達(dá)基因片段，共獲得

2、45條鹿茸生長過程中差異表達(dá)片段，回收了15條，其中14條克隆測(cè)序，經(jīng)Blast比對(duì)發(fā)現(xiàn)5條序列(EST1、EST2、EST3、EST4和EST5)分別與已知基因(COL9A3、MALAT1、LOX、BCLAF1)高度同源，EST3與EST5來源于LOX基因，其它序列在數(shù)據(jù)庫中均無同源基因。采用實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)一步檢測(cè)LOX基因表達(dá)水平，與mRNA差異顯示結(jié)果基本一致。
　　本試驗(yàn)初步發(fā)現(xiàn):COL9A3在鹿茸生長前期不表達(dá)，后期的

3、表達(dá)量大于中期;MALAT1在鹿茸生長中期表達(dá)量最高，前期至中期表達(dá)上調(diào)，中期至后期表達(dá)下調(diào);LOX在鹿茸生長中、后期的表達(dá)量大于前期;BCLAF1只在鹿茸生長的后期表達(dá)。實(shí)時(shí)定量結(jié)果顯示:鹿茸間充質(zhì)生長的3個(gè)時(shí)期，LOX mRNA表達(dá)水平呈上調(diào)趨勢(shì)，中期表達(dá)量最高，顯著高于前期(P＜0.05)，后期與前期、中期差異均不顯著（P＞0.05），提示該基因參與鹿茸間充質(zhì)前期至后期的生長，推測(cè)其可能促進(jìn)了間充質(zhì)細(xì)胞的快速增殖，協(xié)同其它因子使膠