重組人乳頭瘤病毒31型L1蛋白的基礎(chǔ)及應(yīng)用研究.pdf

1、廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫(xiě)作中參考其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標(biāo)明，并符合法律規(guī)范和《廈門大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活動(dòng)規(guī)范(試行)》。另外，該學(xué)位論文為(夏寧邵教授)課題(組)的研究成果，獲得(夏寧邵教授)課題(組)經(jīng)費(fèi)或?qū)嶒?yàn)室的資助，在(夏寧邵教授)實(shí)驗(yàn)室完成。(請(qǐng)?jiān)谝陨侠ㄌ?hào)內(nèi)填寫(xiě)課題或課題組負(fù)責(zé)人或?qū)嶒?yàn)室名稱，未有此項(xiàng)聲明內(nèi)容的，可以不作特別聲明

2、。)聲明人(簽名)：耋矸勾畛年乃月’1日摘要摘要人乳頭瘤病毒(Humanpapillomavirus，HPV)是一種小的無(wú)包膜DNA病毒，能夠引起生殖器部位的多種良性及惡性病變。其中以宮頸癌危害最為嚴(yán)重。目前，世界范圍內(nèi)每年宮頸癌新發(fā)病例約50萬(wàn)，位居女性常見(jiàn)癌癥的第二位，其中86％的病例發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家。研究表明，全球803％的宮頸癌與高危型的HPVl6(535％)、18(172％)、45(67％)和31(29％)相關(guān)。現(xiàn)有的第一個(gè)宮

3、頸癌疫苗已能夠?qū)PVl6／18兩種高危型病毒的感染提供保護(hù)，但是對(duì)上述兩種型別之外的高危HPV保護(hù)率有限。對(duì)于第二代宮頸癌疫苗的一個(gè)主要要求就是必須能夠包含更多的高危型別，解決第一代疫苗覆蓋范圍有限這一嚴(yán)重不足。HPV31作為一個(gè)重要的高危HPV型別是第二代宮頸癌疫苗所必需包含的組份。本研究對(duì)HPV31L1蛋白的表達(dá)菌株構(gòu)建，表達(dá)及純化工藝，免疫原性等方面開(kāi)展了研究，以期為包含HPV31成份的第二代宮頸癌疫苗研究奠定基礎(chǔ)。本研究構(gòu)建了

4、pTOT731N27C表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌Er2566，以非融合的形式可溶表達(dá)了HPV31N27CL1蛋白，并經(jīng)過(guò)SP、CHTII和Butyl等一系列色譜層析純化后，其純度高于90％。純化的Ll蛋白在適宜pH和鹽濃度的條件下，可以組裝成病毒顆粒(VirusLikeParticles，VLPs)。進(jìn)一步將小量制備工藝放大到中試規(guī)模，所制備的VLP原液分子量、細(xì)菌內(nèi)毒素和外源DNA含量等質(zhì)量指標(biāo)能符合中國(guó)藥典要求。本研究將HPV31VLP

5、吸附于氫氧化鋁佐劑上，制備HPV31單價(jià)疫苗。該疫苗在小鼠試驗(yàn)中被證實(shí)能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體：免后5week中和抗體滴度達(dá)到104，于2week和6week分別加強(qiáng)免疫，則中和抗體滴度可上升至105。而HPV31VLP疫苗的效力ED50為000499。本研究中還使用HPV31VLP免疫小鼠，獲得了HPV31型單克隆抗體16株，其中有4株兔多抗血清阻斷率超過(guò)50％的優(yōu)勢(shì)單抗，可作為HPV31VLPs質(zhì)控用單抗。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)不同的終止密