人乳頭瘤病毒11型L1基因原核表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建及鑒定.pdf

1、近年來(lái)，性傳播疾病(STD)逐年增多，而其中尖銳濕疣(CA)的發(fā)病率占性病構(gòu)成比的24.73％，居第二位。人乳頭瘤病毒(HPV)型別眾多，而尖銳濕疣主要是由HPV 11型引起的。HPV基因組中的晚期區(qū)基因L1編碼主要衣殼蛋白，具有穩(wěn)定的免疫原性。在原核表達(dá)系統(tǒng)中，L1基因表達(dá)后可自行組裝成不含病毒DNA的病毒樣顆粒(VLPs)。VLPs具有與天然病毒相似的空間構(gòu)象、免疫特性和生物學(xué)活性，因此以Ll為保護(hù)性抗原構(gòu)建的疫苗在預(yù)防HPV?感染

2、方面發(fā)揮著重要的作用。 本研究首先從天津地區(qū)尖銳濕疣患者新鮮組織標(biāo)本中提取 HPV DNA，并用PCR方法對(duì)其進(jìn)行分型，篩選出HPV 11 型病毒DNA。用 PCR 擴(kuò)增出帶有酶切識(shí)別位點(diǎn)的HPV11 L1基因片段。利用PCR產(chǎn)物兩末端帶有的單個(gè) A 堿基，與帶有單個(gè) T 堿基末端的 pMDl8-T 載體借助堿基互補(bǔ)連接，構(gòu)建成質(zhì)粒pMDl8T-HPV11L1，并進(jìn)行了酶切鑒定以及 L1 基因的 PCR 鑒定和序列分析。從該質(zhì)粒

3、中酶切獲取L1基因片段，并將其插入帶有相同粘性末端的表達(dá)載體質(zhì)粒pET42a構(gòu)建成表達(dá)HPV11L1蛋白的重組表達(dá)質(zhì)粒pET42a-HPV11L1，并對(duì)其進(jìn)行了酶切以及 L1 基因的 PCR 鑒定和序列分析。最后對(duì)該重組表達(dá)質(zhì)粒pET42a-HPV11 L1在大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行了初步表達(dá)。 本研究將HPV11型L1基因克隆入pET42a原核表達(dá)載體，成功構(gòu)建了pET42a-HPV11L1，并在大腸桿菌中得到了高效表