分子伴侶促進截短型人乳頭瘤病毒58亞型L1蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達.pdf

1、人乳頭瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）為雙鏈環(huán)狀DNA病毒，具有多種亞型，根據(jù)感染后引起病變的差異，將其分為低危型和高危型，它通過感染人體的表皮和粘膜鱗狀上皮進而引發(fā)尋常疣、扁平疣、外陰癌、前列腺癌、口腔癌、宮頸癌等疾病。其中HPV58亞型屬于高危型，與宮頸癌等的發(fā)生密切相關。在亞洲地區(qū)宮頸病變的婦女中，HPV58亞型的感染率很高，嚴重威脅著廣大女性的健康，然而國內(nèi)HPV疫苗研究相對落后，目前尚沒有成熟的疫苗產(chǎn)

2、品，只有葛蘭素史克（Glaxosmithkline，GSK）的HPV二價（HPV16/18）疫苗在中國上市，我國又是宮頸癌高發(fā)國家，迫切需求自主研發(fā)有效的HPV58疫苗。本課題旨在研究一種高效、廉價的HPV58 L1蛋白表達系統(tǒng)，為進一步制備HPV58預防性疫苗奠定基礎。
　　本研究將含有分子伴侶的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌（Escherichia coli，E.coli）BL21感受態(tài)細胞內(nèi)，制備含有分子伴侶pTf16的E.coli BL

3、21感受態(tài)細胞，再將含有重組表達載體 pGEX-6P-HPV58-L1的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入上述感受態(tài)細胞，構(gòu)建重組共表達菌株，經(jīng)初步誘導表達證實，重組蛋白GST-HPV58 L1與分子伴侶pTf16可實現(xiàn)表達，可溶性分析結(jié)果顯示分子伴侶能夠顯著促進重組蛋白的可溶性表達；通過優(yōu)化IPTG濃度、誘導溫度、L-阿拉伯糖濃度與L-阿拉伯糖誘導時間，篩選出最佳表達條件：加入2.0 mg/ml的L-阿拉伯糖，37℃，220 rpm誘導表達20 min；再加入

4、1.0 mmol/L的IPTG，18℃，誘導表達24 h。將獲得的重組蛋白經(jīng)GST親和層析柱純化，采用Prescission Protease酶切去除GST標簽，經(jīng)SDS-PAGE與Western blot鑒定結(jié)果顯示，約在50 KD處出現(xiàn)截短型HPV58 L1蛋白的特異性條帶，其純度可達90％以上。將獲得的截短型HPV58 L1蛋白免疫昆明小鼠，經(jīng)ELISA檢測血清效價，結(jié)果顯示，不同小鼠個體間免疫應答水平存在一定差異，無論是高免疫劑