人乳頭瘤病毒16型L1-E7融合蛋白在原核系統(tǒng)中的表達(dá)與純化.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文人乳頭瘤病毒16型L1E7融合蛋白在原核系統(tǒng)中的表達(dá)與純化姓名：葉振梅申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：趙瑞景田厚文20030301中文摘些同，但免疫學(xué)特性卻相似。帶有E7膚段的嵌合型pentamer是否可以誘導(dǎo)產(chǎn)生預(yù)防及治療性的免疫效果，日前國內(nèi)外尚沒有報道。由于，大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)具有成本低、蛋白表達(dá)量高，容易純化等優(yōu)點，因此本實驗采用大腸桿菌表達(dá)即v16L6HPV16LlE7融合蛋白，目的是獲得嵌合型p

2、entamer為研制HPV預(yù)防治療性疫苗提供一條簡單、經(jīng)濟(jì)的途徑。方法:本文首先利用PCR的方法擴(kuò)增出C末端缺失102個核普酸的HPV16Ll基因編碼序列，命名為LIAC34a同樣方法擴(kuò)增出HPV16E7基因N端180個核普酸的編碼序列，命名為E7N60。將E7N60和LIAC34拼接成嵌合基因，經(jīng)測序證實嵌合基因與設(shè)計的序列相符，讀碼框架正確。將該嵌合基因克隆到原核表達(dá)載體pGEX2T中，獲得表達(dá)GSTL1E7融合蛋白的重組質(zhì)粒pGE

3、XLIAC34E7N60，并在大腸桿菌JM109中表達(dá)。該含有GST標(biāo)簽的融合蛋白以水溶性形式存在，分子量約為85KID，與預(yù)期的分子量相符合，表達(dá)量約占菌體總蛋白的8%一10%。利用GlutathioneSepharose4B親和層析純化GST融合蛋白，凝血酶酶切后經(jīng)Superdex200分子篩純化，獲得不含有GST的LlE7嵌合蛋白。經(jīng)純化得到的蛋白GSTL1AC34E7N60、LIOC34E7N60分別用抗HPV16L1單克隆抗體