載脂蛋白L1自身調(diào)控機(jī)制的初步研究.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化是嚴(yán)重影響人類健康的疾病,目前公認(rèn),動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病,動(dòng)脈血管的損傷與內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞在炎癥因子等危險(xiǎn)因素刺激下許多功能失代償有關(guān)其中包括了增值、凋亡、自噬等功能的失代償,而脂類代謝紊亂恰好參與了動(dòng)脈粥樣樣硬化的炎癥機(jī)制。APOL1是近些年發(fā)現(xiàn)的新型載脂蛋白,其血漿濃度與高脂血癥相關(guān),其自噬功能可能與斑塊穩(wěn)定相關(guān),故APOL1可能與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。但是APOL1在動(dòng)脈粥樣硬化中的具體作用及自身

2、調(diào)控機(jī)制目前尚不清楚,因此,APOL1自身調(diào)控的機(jī)制研究顯得尤為重要,進(jìn)而為其在血脂代謝中的作用、其自噬功能在動(dòng)脈粥樣硬化中發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制研究做準(zhǔn)備。本實(shí)驗(yàn)成功夠建了APOL1調(diào)控區(qū)(-1918nt~+265nt)及各分段的克隆,將其通過(guò)轉(zhuǎn)染的方法導(dǎo)入細(xì)胞,通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告檢測(cè)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)APOL1的調(diào)控區(qū)-1918nt~+265nt在肝癌Huh7細(xì)胞株轉(zhuǎn)錄活性最強(qiáng);-80nt~+265nt幾乎保留了調(diào)控區(qū)-1918nt~+265

3、nt全部轉(zhuǎn)錄活性。將調(diào)控區(qū)-80nt~+265nt利用TESS、TFsearch、TFbind、JASPAR軟件預(yù)測(cè),確定了5個(gè)潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)SP/KLF(1)、SP/KLF(2)、HNF3、IRF、INR。將潛在轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)通過(guò)定點(diǎn)突變的方法進(jìn)行突變,除了SP/KLF(2)位點(diǎn)外其余的4個(gè)轉(zhuǎn)錄活性都降低了。將INF-γ干預(yù)Huh7細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)其對(duì)APOL1轉(zhuǎn)錄的上調(diào)作用主要是通過(guò)IRF轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)發(fā)揮作用的。結(jié)論:1、初