2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:不同濃度二甲雙胍作用乳腺癌MDA-MB-435S細胞,觀察對細胞形態(tài)的影響,以及檢測細胞中NF-κBp65、未磷酸化IκB-α、Lin28B表達的情況。探討二甲雙胍能否通過作用NF-κB和Lin28B進一步影響乳腺癌細胞MDA-MB-435S的自我復(fù)制能力和多向分化潛能相關(guān)基因HMGA2和HRas的轉(zhuǎn)錄。
  方法:NF-κB是細胞炎癥反應(yīng)鏈的重要蛋白復(fù)合物,NF-κB是由p65與p50組成,在失活狀態(tài)下,NF-κB是二聚體

2、結(jié)構(gòu),正常狀態(tài)下IκB-α與NF-κB結(jié)合抑制其活性。二甲雙胍能夠抑制IκB-α的磷酸化,IκB-α的磷酸化被阻止,NF-κB的活性不能發(fā)揮。TNF-α可引起抑制劑IκB-α泛素化、磷酸化,IκB-α功能退化可激活NF-κB,p65解離后進入核內(nèi)作用下游靶點,進一步引起炎癥或腫瘤的發(fā)生。
  首先,將乳腺癌細胞分為三組,對照組、3mM二甲雙胍組、10mM二甲雙胍,對照組不用二甲雙胍干預(yù),3mM二甲雙胍組和10mM二甲雙胍組的細胞培

3、養(yǎng)時培養(yǎng)液中二甲雙胍的終濃度分別為3mM和10mM,三組分別干預(yù)細胞48h后,運用WesternBlot檢測乳腺癌細胞MDA-MB-435S中NF-κBp65、未磷酸化IκB-α、Lin28B的表達情況,10mM濃度二甲雙胍可引起三種成份表達均發(fā)生變化,選擇其進行下一步實驗。
  然后,再將乳腺癌細胞分為四組,對照組、TNF-α組、TNF-α+10mM二甲雙胍組、10mM二甲雙胍組。TNF-α+10mM二甲雙胍組細胞預(yù)先用終濃度5

4、0μg/ml的TNF-α干預(yù)24h,然后加入終濃度為10mM的二甲雙胍繼續(xù)干預(yù)。所有組共作用48h,提取細胞總蛋白和RNA進行檢測,WesternBlot檢測各組乳腺癌細胞MDA-MB-435S中NF-κBp65、Lin28B的表達情況,RT-PCR檢測10mM二甲雙胍組與對照組中與乳腺癌細胞自我復(fù)制和轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因HMGA2和H-Ras的轉(zhuǎn)錄水平。
  結(jié)果:3mM二甲雙胍組與對照組相比,NF-κBp65表達減少(P<0.05)

5、,未磷酸化IκB-α表達量增加(P<0.05),Lin28B的表達無明顯變化(P>0.05)。10mM二甲雙胍組中NF-κBp65和Lin28B的表達均減少(P均<0.05),未磷酸化IκB-α表達量增加(P<0.05)。用50μg/mlTNF-α干預(yù)乳腺癌細胞48h后,細胞中NF-κBp65、Lin28B的表達均有明顯增加(P<0.05)。TNF-α+10mM二甲雙胍組與對照組NF-κBp65、Lin28B均有明顯下降(P均<0.05

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