紫草抗胚胎植入作用與Muc1蛋白在子宮內(nèi)膜表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、目的:胚胎著床(implantation)也稱胚胎植入或胚胎粘附,即處于接收狀態(tài)的子宮內(nèi)膜與活化狀態(tài)的胚胎相互作用,最終胚胎滋養(yǎng)層和子宮內(nèi)膜建立密切聯(lián)系的過程。根據(jù)對胚胎植入敏感性不同,子宮可分為接受前期(prereceptive)、接受期(receptive)、及非接受期(refractory)。子宮處于接受態(tài)的時期又稱“著床窗口(implantation window)”,此時,子宮內(nèi)膜允許胚胎植入,但持續(xù)時間很短。胚胎植入的過程分

2、為定位期(apposition)、粘附期(attachment)、和侵入期(invasion)。但子宮內(nèi)膜接受性和胚胎活化狀態(tài)是兩個獨(dú)立事件,只有同步進(jìn)行,胚胎才能正常植入。在植入過程中,有許多粘附分子和抗粘附分子發(fā)揮作用,粘蛋白1(Muc1)便是抗粘附分子之一。Muc1蛋白在植入窗口期通過有規(guī)律的消失來允許胚胎植入。
　　 中藥紫草(Lithospermum erythrorhizon)是一種抗生育臨床常用藥,具有悠久的歷史。

3、已有研究證明紫草在多種哺乳動物中具有抗生育效果,但作用機(jī)理尚不甚明確。所以我們采取昆明小白鼠為研究對象,應(yīng)用蘇木素-伊紅(HE)方法、免疫組織化學(xué)染色(immunohistochemistry)、免疫印跡法(Western blot)等研究紫草在胚胎植入過程中對子宮內(nèi)膜及Muc1蛋白的影響,以期闡明紫草抗植入的機(jī)理。
　　 方法:將未經(jīng)產(chǎn)雌性昆明小白鼠與具有正常生育能力的雄性昆明小白鼠或輸精管結(jié)扎的雄性昆明小白鼠按2:1合籠,次

4、日早7點(diǎn)查見陰栓者,為真孕或假孕第一天。
　　 (1)取168只真孕小鼠隨機(jī)分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ實(shí)驗(yàn)組及對照組,每組42只。在受精后的第1、2、3、4天上午8時,實(shí)驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的孕鼠分別經(jīng)胃灌服濃度為0.35g／ml、0.525g／mL、0.7g／mL的紫草浸液,對照組灌服等體積的生理鹽水。第4天晚上22:00點(diǎn),每組取12只孕鼠脫臼處死,剖腹取出Y形子宮,一側(cè)固定進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)切片,用于HE染色和免疫組化染色,另一側(cè)子宮置

5、-80℃冰箱保存,用于Western blot檢測；第8天上午8:00點(diǎn),每組取15只孕鼠頸椎脫臼處死,觀察胚胎植入率和紫草對小鼠胚胎植入的生物學(xué)效應(yīng)；每組剩余的15只雌鼠繼續(xù)妊娠,觀察紫草抗生育情況,待產(chǎn)仔后30天重新交配再次觀察產(chǎn)仔情況。
　　 (2)取真孕第一天60只雌鼠隨機(jī)分為4組,每組15只。在受精后的11—14天,上午8時,實(shí)驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的孕鼠分別經(jīng)胃灌服濃度為0.35g／mL、0.525g／mL、0.7g／mL的

6、紫草浸液,對照組灌服等體積的生理鹽水。至第18天,孕鼠脫臼處死觀察胚胎存活情況。
　　 (3)取假孕母鼠48只隨機(jī)分為4組,每組12只,在假孕后的第1、2、3、4天上午8:00點(diǎn),實(shí)驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的孕鼠分別經(jīng)胃灌服濃度為0.35g／mL、0.525g／mL、0.7g／mL的紫草浸液,對照組灌服等體積的生理鹽水。第4天晚上22:00,每組取12只孕鼠脫臼處死,剖腹取出Y形子宮,一側(cè)固定進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)切片,用于HE染色和免疫

7、組化染色,另一側(cè)子宮置-80℃冰箱保存,待Western blot檢測。
　　 結(jié)果:
　　 1.紫草抗胚胎植入結(jié)果:在實(shí)驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及對照組中,每組有胚胎成功植入的雌鼠數(shù)分別為6、4、1、15,每組的植入位點(diǎn)平均數(shù)分別為6.17±0.79、5.25±0.95、4、10.40±0.52,抗植入率分別為40％、73.3％、93.4％、0。
　　 2.紫草抗生育可逆性結(jié)果:在實(shí)驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及對照組中,每組雌鼠第一次懷

8、孕數(shù)分別為7、4、1、15,每組產(chǎn)仔的平均數(shù)分別為5.28±0.64、3.75±0.48、3、10.54±0.62；每組雌鼠第二次懷孕數(shù)分別為15、15、15、15,每組產(chǎn)仔的平均數(shù)分別為11.11±0.52、9.47±0.57、10.33±0.59、10.54±0.56。
　　 3.紫草終止妊娠流產(chǎn)結(jié)果:在實(shí)驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及對照組中,每組懷孕雌鼠數(shù)分別為:8、7、4、15,每組懷孕雌鼠的平均植入位點(diǎn)分別為:8.38±0.67、7

9、.14±0.51、5.75±0.48、10、33±0.57。
　　 4.HE染色結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞排列紊亂,隨著藥量增加,紊亂程度增加。
　　 5 Muc1蛋白表達(dá)結(jié)果:免疫組化染色和Western blot結(jié)果顯示,真孕雌鼠實(shí)驗(yàn)組子宮內(nèi)膜Muc1蛋白表達(dá)量增加,與灌服藥量成正相關(guān),假孕雌鼠實(shí)驗(yàn)組子宮內(nèi)膜Muc1蛋白表達(dá)量亦增加。真孕雌鼠和假孕雌鼠對應(yīng)組別的Muc1蛋白表達(dá)量一致。
　　 結(jié)論: