KRAS在早孕小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)及其對胚胎著床過程的調(diào)控作用.pdf

1、目的：
　　成功的胚胎著床依賴于有活性的胚泡及可接受性的子宮之間的相互作用，在這一過程中母體子宮內(nèi)膜發(fā)生著一系列的生理變化以達(dá)到其可容性狀態(tài)。KRAS作為一個(gè)癌基因參與細(xì)胞的各種生理變化，包括增殖，分化，凋亡，存活等等。為了探討 KRAS在小鼠胚胎著床中的調(diào)控作用，利用熒光定量PCR，免疫組化及Western blot研究KRAS基因及其蛋白在早孕小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)規(guī)律，通過體內(nèi)及體外人工誘導(dǎo)蛻膜化實(shí)驗(yàn)，研究KRAS對子宮內(nèi)膜的

2、蛻膜化過程的調(diào)控作用，并通過體外沉默KRAS基因表達(dá)，探討其對小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖調(diào)控作用，最后進(jìn)一步通過體內(nèi)功能實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)KRAS對小鼠胚胎的著床調(diào)控作用，為進(jìn)一步探討小鼠的胚胎著床機(jī)制打下基礎(chǔ)。
　　方法：
　　（1）應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR, Western blot及免疫組化研究KRAS基因及其蛋白在早孕小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)規(guī)律。
　?。?）通過體內(nèi)及體外人工誘導(dǎo)蛻膜化，探討KRAS對子宮內(nèi)膜的蛻膜化的

3、調(diào)控作用。
　?。?）ELISA檢測下調(diào)KRAS蛋白表達(dá)，體外誘導(dǎo)蛻膜化后基質(zhì)細(xì)胞PRL的分泌水平。
　?。?）應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)染KRAS siRNA后基質(zhì)細(xì)胞的周期分析。
　?。?）宮角注射KRAS siRNA，通過尾靜脈注射臺盼藍(lán)標(biāo)記著床點(diǎn)，分析胚胎著床情況。
　　結(jié)果：
　?。?）KRAS mRNA及蛋白表達(dá)總量在早孕及假孕的小鼠子宮內(nèi)膜中無明顯差異。
　?。?）免疫組化結(jié)果顯示KRAS蛋白

4、在早孕小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)位置發(fā)生改變，在妊娠D1, D4，D5，D6天主要表達(dá)在腔上皮及腺上皮，并逐漸增強(qiáng)，而在著床點(diǎn)KRAS主要表達(dá)在子宮內(nèi)膜初級蛻膜區(qū)，并隨著初級蛻膜區(qū)擴(kuò)大，向外擴(kuò)展。
　?。?）KRAS調(diào)控小鼠子宮內(nèi)膜的蛻膜化過程及影響基質(zhì)細(xì)胞的周期。
　?。?）KRAS蛋白表達(dá)影響小鼠胚胎著床率。
　　結(jié)論：
　　KRAS通過在早孕小鼠子宮內(nèi)膜中表達(dá)位置的空間改變，調(diào)控小鼠子宮內(nèi)膜的蛻膜化過程及對基質(zhì)細(xì)