Mfn2基因促進血管平滑肌源性泡沫細胞膽固醇外排機制研究.pdf

1、第一部分外源性Mfn2基因表達抑制平滑肌源性泡沫細胞形成
　　1.目的：
　　研究平滑肌源性泡沫細胞內外源性Mfn2基因表達水平對于泡沫細胞形成的影響,對細胞內膽固醇流出的影響,研究其可能存在的分子機制。
　　2.方法：
　　收集新鮮血清,采用密度梯度離心法提取LDL,銅離子氧化為ox-LDL后,與平滑肌細胞共培養(yǎng)24h或者48h,油紅O染色觀察泡沫細胞形成,體外構建平滑肌源性泡沫細胞模型。采用不同滴度水平的Ad

2、v-Mfn2(20pfu/cell、40pfu/cell和60pfu/cell)干預平滑肌細胞模型24h后,觀察泡沫細胞形成的變化情況;酶化學法檢測細胞內總膽固醇和游離膽固醇含量;采用Western Blot方法檢測膽固醇外轉運蛋白ABCA1、ABCG1及核受體蛋白PPARγ蛋白磷酸化水平。
　　3.結果：
　　重組腺病毒Adv-Mfn2(60pfu/cell)轉染到平滑肌細胞內作用24小時后,平滑肌源性泡沫細胞脂滴明顯減少

3、,酶化學法檢測證實細胞內總膽固醇含量下降,膽固醇酯/總膽固醇比例明顯下降。Western Blot證實重組腺病毒Adv-Mfn2干預組PPARγ蛋白磷酸化水平下降,膽固醇轉運蛋白ABCA1、ABCG1表達水平上調。
　　4.結論：
　　細胞內外源Mfn2基因在在適當水平的表達可以干預泡沫細胞內膽固醇的蓄積從而可以降低泡沫細胞形成,這一機制是通過調節(jié)PPARγ磷酸化活性及其下游的膽固醇外轉運蛋白ABCA1和ABCG1的表達來實

4、現(xiàn)。
　　第二部分外源性Mfn2基因對泡沫細胞形成絲裂原活化蛋白激酶信號通路的影響
　　1.目的：
　　研究外源性Mfn2基因在平滑肌細胞內不同表達水平對于平滑肌源性泡沫細胞內與PPARγ活性相關的絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信號通路的影響,研究外源性Mfn2基因抑制平滑肌源性泡沫細胞形成的分子信號通路。
　　2.方法：
　　利用不同滴度水平重組腺病毒Adv-Mfn2(20pfu/cell、40pfu/

5、cell和60pfu/cell)轉染大鼠主動脈平滑肌細胞24h,然后加入ox-LDL與平滑肌細胞共培養(yǎng)48小時,采用Western Blot檢測ERK1/2、JNK、p38MAPKs信號通路蛋白磷酸化水平,統(tǒng)計學分析上述蛋白磷酸化水平的差異。
　　3.結果：
　　Western Blot結果顯示重組腺病毒Adv-mfn2在60pfu/cell水平轉染大鼠平滑肌細胞條件下,ERK1/2、p38蛋白磷酸化水平明顯下調,而與JNK