Mfn2基因調(diào)節(jié)泡沫細胞膽固醇轉(zhuǎn)運作用及其機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分:Mfn2基因表達與動脈粥樣硬化斑塊形成
　　目的：
　　通過比較C57/BL小鼠與apoE基因敲除小鼠主動脈斑塊組織中Mfn2蛋白表達水平差異；比較動脈粥樣硬化和非動脈粥樣硬化的人主動脈和冠狀動脈中Mfn2蛋白表達水平差異，探討Mfn2蛋白表達與動脈粥樣硬化形成的相關(guān)性。
　　方法：
　　通過高脂飼料喂養(yǎng)apoE基因敲除小鼠建立動脈粥樣硬化模型。apoE基因敲

2、除小鼠和C57/BL小鼠麻醉后心臟取血處死，取主動脈組織行油紅O染色觀察動脈粥樣硬化斑塊，圖像軟件分析油紅染色陽性面積，免疫熒光染色分析Mfn2蛋白表達，western blot分析血管組織中Mfn2蛋白表達水平。
　　分別取非心源性原因死亡患者和因冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者冠狀動脈和主動脈組織，免疫熒光染色分析Mfn2蛋白表達，western blot分析血管組織中Mfn2蛋白表達水平，實時定量PCR分析血管組織中Mfn2 m

3、RNA表達水平。
　　結(jié)果：
　　與C57/BL小鼠相比，apoE基因敲除小鼠主動脈斑塊組織中Mfn2蛋白表達水平明顯減少；與無動脈粥樣硬化的人主動脈和冠狀動脈相比，CD68陽性巨噬細胞增多的冠心病患者冠狀動脈和主動脈粥樣斑塊組織中，Mfn2蛋白和mRNA表達水平明顯減少。
　　結(jié)論：
　　與健康小鼠主動脈組織相比，動脈粥樣硬化小鼠的斑塊組織中Mfn2低表達；與無動脈粥樣硬化的人主動脈和冠狀動脈相比，冠心病患者血

4、管的斑塊組織中Mfn2低表達，證實Mfn2蛋白表達與動脈粥樣硬化斑塊形成負相關(guān)，其可能與巨噬細胞源性泡沫細胞的形成有關(guān)。
　　第二部分:Mfn2基因?qū)ε菽毎|(zhì)沉積的影響及其機制研究
　　目的：
　　研究攜帶Mfn2基因的腺病毒（adv-Mfn2）干預對泡沫細胞形成的影響，及其對膽固醇轉(zhuǎn)運蛋白的影響及其機制，探討Mfn2基因抗泡沫細胞形成的分子機制。
　　方法：
　　氧化低密度脂蛋白（oxLDL）誘導巨噬

5、細胞構(gòu)建泡沫細胞模型，不同滴度adv-Mfn2感染巨噬細胞24和48小時后，通過油紅染色觀察泡沫細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積的形態(tài)學改變，通過膽固醇檢測試劑盒分析細胞內(nèi)膽固醇和膽固醇酯含量。以adv-lacZ為對照，觀察不同滴度adv-Mfn2對巨噬細胞源性泡沫細胞膽固醇轉(zhuǎn)運蛋白和過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）的影響；與羅格列酮或GW9662共刺激下，Western blot和實時定量PCR檢測膽固醇轉(zhuǎn)運蛋白及mRNA表達變化；進一步應用

6、PD98059或SB203580干預泡沫細胞后，Western blot和實時定量PCR檢測PPARγ磷酸化水平及膽固醇轉(zhuǎn)運子ABCA1和SR-BI mRNA水平變化。
　　結(jié)果：
　　過表達Mfn2降低巨噬細胞源性泡沫細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積和細胞內(nèi)膽固醇含量及膽固醇酯/總膽固醇比值，而adv-siRNA逆轉(zhuǎn)此作用；與adv-lacZ相比，adv-Mfn2促進巨噬細胞源性泡沫細胞過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）及其下游的膽

7、固醇轉(zhuǎn)運蛋白ABCA1、ABCG1和SR-BI的表達，而減少膽固醇攝入受體CD36的表達。羅格列酮和GW9662分別促進和抑制Mfn2基因過表達對膽固醇外排蛋白ABCA1、ABCG1和SR-BI的表達；應用PD98059或 SB203580干預泡沫細胞后，部分抵消adv-siRNA對PPARγ磷酸化的促進作用及對膽固醇轉(zhuǎn)運蛋白mRNA的降低作用。
　　結(jié)論：
　　Mfn2過表達，通過抑制MAPK通路磷酸化，促進PPARγ蛋白