降鈣素基因相關(guān)肽對大鼠血管平滑肌增殖及表型轉(zhuǎn)化的影響——用血管平滑肌增殖器官模型和細胞模型.pdf

1、研究目的：通過CGRP作用血管平滑肌增殖器官和細胞模型，檢測與血管平滑肌增殖及表型轉(zhuǎn)化的相關(guān)基因HRG．1和SM22Q的表達，闡明CGRP對血管平滑肌增殖及表型轉(zhuǎn)化是否有影響和它們之間的關(guān)系，并同時對本實驗室建立的血管平滑肌增殖器官和細胞模型的應用價值作出評估。 研究方法：實驗一(用平滑肌增殖器官模型)：取150-200g健康雄性SD大鼠的主動脈，按本實驗室建立血管平滑肌增殖器官模型方法體外培養(yǎng)血管，實驗分為A：模型組CGRP作

2、用；B：模型組無CGRP作用；C：正常對照組(不培養(yǎng))。每組4條血管，血管培養(yǎng)在含20％胎牛血清DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)8天后取出做實驗(CGRP的終濃度為2×10。／mol／L)，用于免疫細胞化學檢測的血管取出前24小時用5-Brdu(8×10-4mol／L)標記，作石蠟切片，其它血管用于RT-PCR實驗。實驗二(用細胞增殖模型)：血管平滑肌增殖模型細胞取大鼠主動脈經(jīng)體外培養(yǎng)8天后，再貼壁傳代培養(yǎng)，對照組細胞則用新鮮血管直接貼壁傳代培養(yǎng)。

3、實驗分為A：細胞模型組CGRP作用；B：細胞模型組無CGRP作用；C：正常對照組。細胞培養(yǎng)在含20％胎牛血清DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)(CGRP的終濃度為2×10。／mol／L)，用于免疫細胞化學檢測的細胞取出前24小時用5-Brdu(8×10'4mol／L)標記，其它細胞用于RT-PCR實驗。以上實驗用HE染色和抗5-BrdU免疫細胞化學染色觀察細胞增殖，RT-PCR檢測與血管平滑肌增殖相關(guān)基因HRG．1和表型標志基因SM22Q的表達。

4、 結(jié)果：實驗一：HE染色可見體外培養(yǎng)8天的血管有增生斑塊，而加了CGRP組血管壁除有彈性纖維紊亂外，未見有增生斑塊；用免疫細胞化學染色進一步證實未加CGRP組的血管中膜可見大量被標記的增生細胞；而加CGRP作用組則標記細胞明顯減少。RT-PCR檢測表明CGRP對HRG．1和SM22QmRNA的表達都有明顯的上調(diào)作用。提示：CGRP對血管平滑肌細胞增殖起抑制作用可能與sM22a和HRG一1基因上調(diào)有關(guān)。實驗二：從免疫細胞化學染色可以看

5、出：未加CGRP的模型組有大量棕黃色標記增殖的細胞核；而加入CGRP共培養(yǎng)組標記的增殖細胞核數(shù)量大大減少；正常對照組未見標記的增殖細胞。RT-PCR檢測表明各組平滑肌細胞中均有HRG-1和SM22amRNA的表達，未加CGRP的模型組HRG．1和SM22amRNA的表達明顯減少，而加入CGRP共培養(yǎng)組HRG．1和SM22QmRNA表達與未加CGRP組相比表達明顯增加。 結(jié)論：1．CGRP對血管平滑肌細胞增殖有明顯抑制作用，上調(diào)H

6、RG．1的表達司能是CGRP對血管平滑肌細胞增殖抑制作用的機制之一。2．CGRP可上調(diào)VSMC的SM22Q的表達，表明CGRP可使VSMC從合成型向收縮型逆轉(zhuǎn)。3．通過CGRP在本實驗室建立起來的血管平滑肌增殖器官和細胞模型上驗證結(jié)果與體內(nèi)作用相同，表明在我們實驗室所建立的血管平滑肌增殖器官和細胞模型完全可用于實際研究中，為血管平滑肌增殖的研究提供了一個良好的實驗平臺。4．有待解決的問題：本文實驗僅研究CGRP對血管平滑肌SM22Q和H