降鈣素基因相關(guān)肽對(duì)大鼠血管平滑肌增殖及表型轉(zhuǎn)化的影響——用血管平滑肌增殖器官模型和細(xì)胞模型.pdf

1、研究目的：通過(guò)CGRP作用血管平滑肌增殖器官和細(xì)胞模型，檢測(cè)與血管平滑肌增殖及表型轉(zhuǎn)化的相關(guān)基因HRG．1和SM22Q的表達(dá)，闡明CGRP對(duì)血管平滑肌增殖及表型轉(zhuǎn)化是否有影響和它們之間的關(guān)系，并同時(shí)對(duì)本實(shí)驗(yàn)室建立的血管平滑肌增殖器官和細(xì)胞模型的應(yīng)用價(jià)值作出評(píng)估。 研究方法：實(shí)驗(yàn)一(用平滑肌增殖器官模型)：取150-200g健康雄性SD大鼠的主動(dòng)脈，按本實(shí)驗(yàn)室建立血管平滑肌增殖器官模型方法體外培養(yǎng)血管，實(shí)驗(yàn)分為A：模型組CGRP作

2、用；B：模型組無(wú)CGRP作用；C：正常對(duì)照組(不培養(yǎng))。每組4條血管，血管培養(yǎng)在含20％胎牛血清DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)8天后取出做實(shí)驗(yàn)(CGRP的終濃度為2×10。／mol／L)，用于免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)的血管取出前24小時(shí)用5-Brdu(8×10-4mol／L)標(biāo)記，作石蠟切片，其它血管用于RT-PCR實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)二(用細(xì)胞增殖模型)：血管平滑肌增殖模型細(xì)胞取大鼠主動(dòng)脈經(jīng)體外培養(yǎng)8天后，再貼壁傳代培養(yǎng)，對(duì)照組細(xì)胞則用新鮮血管直接貼壁傳代培養(yǎng)。

3、實(shí)驗(yàn)分為A：細(xì)胞模型組CGRP作用；B：細(xì)胞模型組無(wú)CGRP作用；C：正常對(duì)照組。細(xì)胞培養(yǎng)在含20％胎牛血清DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)(CGRP的終濃度為2×10。／mol／L)，用于免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)的細(xì)胞取出前24小時(shí)用5-Brdu(8×10'4mol／L)標(biāo)記，其它細(xì)胞用于RT-PCR實(shí)驗(yàn)。以上實(shí)驗(yàn)用HE染色和抗5-BrdU免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察細(xì)胞增殖，RT-PCR檢測(cè)與血管平滑肌增殖相關(guān)基因HRG．1和表型標(biāo)志基因SM22Q的表達(dá)。

4、 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)一：HE染色可見(jiàn)體外培養(yǎng)8天的血管有增生斑塊，而加了CGRP組血管壁除有彈性纖維紊亂外，未見(jiàn)有增生斑塊；用免疫細(xì)胞化學(xué)染色進(jìn)一步證實(shí)未加CGRP組的血管中膜可見(jiàn)大量被標(biāo)記的增生細(xì)胞；而加CGRP作用組則標(biāo)記細(xì)胞明顯減少。RT-PCR檢測(cè)表明CGRP對(duì)HRG．1和SM22QmRNA的表達(dá)都有明顯的上調(diào)作用。提示：CGRP對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖起抑制作用可能與sM22a和HRG一1基因上調(diào)有關(guān)。實(shí)驗(yàn)二：從免疫細(xì)胞化學(xué)染色可以看

5、出：未加CGRP的模型組有大量棕黃色標(biāo)記增殖的細(xì)胞核；而加入CGRP共培養(yǎng)組標(biāo)記的增殖細(xì)胞核數(shù)量大大減少；正常對(duì)照組未見(jiàn)標(biāo)記的增殖細(xì)胞。RT-PCR檢測(cè)表明各組平滑肌細(xì)胞中均有HRG-1和SM22amRNA的表達(dá)，未加CGRP的模型組HRG．1和SM22amRNA的表達(dá)明顯減少，而加入CGRP共培養(yǎng)組HRG．1和SM22QmRNA表達(dá)與未加CGRP組相比表達(dá)明顯增加。 結(jié)論：1．CGRP對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖有明顯抑制作用，上調(diào)H

6、RG．1的表達(dá)司能是CGRP對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖抑制作用的機(jī)制之一。2．CGRP可上調(diào)VSMC的SM22Q的表達(dá)，表明CGRP可使VSMC從合成型向收縮型逆轉(zhuǎn)。3．通過(guò)CGRP在本實(shí)驗(yàn)室建立起來(lái)的血管平滑肌增殖器官和細(xì)胞模型上驗(yàn)證結(jié)果與體內(nèi)作用相同，表明在我們實(shí)驗(yàn)室所建立的血管平滑肌增殖器官和細(xì)胞模型完全可用于實(shí)際研究中，為血管平滑肌增殖的研究提供了一個(gè)良好的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。4．有待解決的問(wèn)題：本文實(shí)驗(yàn)僅研究CGRP對(duì)血管平滑肌SM22Q和H