Smurf1對(duì)Smad信號(hào)通路的調(diào)節(jié)在舌癌發(fā)生中的作用.pdf

1、腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多因素影響的多步驟復(fù)雜過程，由多種基因參與，主要表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞凋亡受阻、分化障礙、增殖失控。在生理情況下，細(xì)胞的增殖、分化、成熟及凋亡受到多種正負(fù)調(diào)控因子的嚴(yán)格調(diào)控，正、負(fù)調(diào)節(jié)信號(hào)處于動(dòng)態(tài)平衡中，維持著生理狀態(tài)的穩(wěn)定。腫瘤發(fā)生機(jī)制之一可能是細(xì)胞對(duì)負(fù)反饋的抑制物的反應(yīng)性發(fā)生了改變從而使細(xì)胞脫離了正常的生長(zhǎng)調(diào)控。BMP信號(hào)傳導(dǎo)通路的異常與許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，BMP、Smads、靶基因的質(zhì)和量的改變都和人類許多腫瘤發(fā)

2、生密切相關(guān)。泛素-蛋白酶體降解系統(tǒng)廣泛存在于各種真核細(xì)胞中，參與調(diào)控細(xì)胞多種生理進(jìn)程。作為該系統(tǒng)中行使調(diào)控降解功能的核心成員，E3泛素連接酶的重要作用已經(jīng)越來越引起人們的重視。E3泛素連接酶Smurf1作為這一系統(tǒng)的重要組成部分，參與調(diào)控組織中BMP通路中分子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。本研究采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)使舌癌細(xì)胞中Smurf1蛋白產(chǎn)生高表達(dá)，使用Western blot技術(shù)以研究其在舌癌中對(duì)Smad1和Smad5蛋白含量的影響，使用MTT法檢

3、測(cè)其對(duì)舌癌細(xì)胞的影響，為舌癌的治療尋求有效的基因治療方法。
　　 目的:
　　 研究舌癌細(xì)胞中Smurf1過表達(dá)對(duì)Smad1及Smad5蛋白表達(dá)的影響，并且觀察Smurf1蛋白過表達(dá)對(duì)舌癌細(xì)胞增值活性的影響。
　　 方法:
　　 利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將含有Smurf1基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)舌癌cal27細(xì)胞中，利用Western blot技術(shù)檢測(cè)Smurf1蛋白、smad1蛋白、smad5蛋白含量的變化，利用MT

4、T技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后舌癌細(xì)胞增殖活力的變化，并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.含Smurf1基因質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染進(jìn)舌癌細(xì)胞cal27中。Smurf1基因載體質(zhì)粒中含有綠色熒光蛋白基因，轉(zhuǎn)染后從熒光顯微鏡中觀察到含綠色熒光蛋白的舌癌細(xì)胞，說明質(zhì)粒已成功轉(zhuǎn)染進(jìn)入舌癌細(xì)胞。
　　 2.轉(zhuǎn)染后舌癌細(xì)胞中Smurf1蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比明顯升高，Smad1蛋白含量與對(duì)照組相比明顯降低，Smad5蛋白含量與對(duì)照組相比明顯降

5、低。
　　 3.MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后舌癌細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其增殖活力與對(duì)照組相比明顯增高。
　　 結(jié)論:
　　 1.Western Blot檢測(cè)到轉(zhuǎn)染后Smurf1蛋白含量與對(duì)照組相比明顯升高，而Smad1蛋白及Smad5蛋白含量明顯降低，這說明過表達(dá)的Smurf1對(duì)Smad1和Smad5蛋白的表達(dá)產(chǎn)生了抑制作用。
　　 2.MTT檢測(cè)顯示高表達(dá)的Smurf1蛋白增強(qiáng)了舌癌細(xì)胞的增殖活力。
　　 3.高表達(dá)