IN-ag在慢性腎臟病中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、研究背景:
　　慢性腎臟病(chronic kidney disease，CKD)是指腎損傷或腎小球?yàn)V過(guò)率小于60 ml/min/1.73 m2，持續(xù)3個(gè)月，其中腎損傷包括病理改變，血、尿成分異?；蛴跋駥W(xué)檢查異常。目前常用的慢性腎臟病檢測(cè)方法有:尿常規(guī)，尿沉渣，24小時(shí)尿蛋白定量，血肌酐，尿素氮，eGFR，α1-微球蛋白，β2-微球蛋白等。在美國(guó)，CKD進(jìn)展到終末期腎病(ESRD)患者的死亡率約為20％。2013年中國(guó)各城市CKD

2、患病率的橫斷面研究顯示CKD在中國(guó)人群的患病率為11％左右，其中腎功能下降為2.7％，蛋白尿?yàn)?0.3％。在北京CKD的患病率是13.0％，在上海CKD的患病率是11.8％，在中國(guó)的西南部CKD的患病率是18.3％[1]。因此開(kāi)展CKD的發(fā)病機(jī)制與防治研究具有重要的科學(xué)與現(xiàn)實(shí)意義。
　　腎小管是腎組織中腎單位的重要組成部分、其主要功能包括選擇性重吸收和排泄篩選分子以及產(chǎn)生和釋放激素。在CKD中，腎小管病理生理變化不僅與小管病變發(fā)生

3、發(fā)展有關(guān)，與小球病變也密切相關(guān)。同時(shí)，腎小球病變尚可引起小管及間質(zhì)損害，導(dǎo)致腎小管損傷的主要因素包括:腎小球?yàn)V液白蛋白及其他血漿蛋白(如Cubilin，Megalin)、血脂和補(bǔ)體生成異常增多，腎小管上皮細(xì)胞異常激活，腎小管間質(zhì)缺血、缺氧、氧化損傷和炎癥，最終導(dǎo)致小管間質(zhì)纖維化。反之，腎小管間質(zhì)損傷又可進(jìn)一步加重CKD損傷，如腎小管及間質(zhì)損傷可導(dǎo)致炎癥細(xì)胞在間質(zhì)積累，腎小球損傷和腎單位的數(shù)量減少和功能喪失?？傊?，CKD時(shí)，小管與小球相互

4、影響，不斷造成腎組織損傷，小球與小管細(xì)胞激活。因此，在CKD的研究中，進(jìn)一步研究腎小管細(xì)胞及間質(zhì)損害機(jī)制將有利于闡明CKD的發(fā)病機(jī)制，確定可能的治療干預(yù)途徑。
　　腎小管間質(zhì)腎炎抗原(Tubulointerstitial antigen，TIN-ag)是人類(lèi)抗腎小管基底膜(TBM)抗體介導(dǎo)的間質(zhì)性腎炎的腎性抗原。TIN-ag表達(dá)主要定位于近段小管基底膜，少部分表達(dá)在遠(yuǎn)端小管和鮑曼氏囊以及腸黏膜的基膜。TIN-ag是一種40-58K

5、D大小的糖蛋白。它對(duì)Ⅳ型膠原蛋白和層粘連蛋白具有較高的親和力。正常情況下。TIN-ag在胎兒腎臟發(fā)育中高表達(dá)，先天性缺失會(huì)導(dǎo)致兒童腎囊性病(JNPHP)等遺傳性小管間質(zhì)缺陷性疾病。TIN-ag的理化特性主要是:作為一種高分子量的糖蛋白，可被剪接成不同大小的分子;通過(guò)共價(jià)鍵與其他基底膜成分結(jié)合;可與人類(lèi)或動(dòng)物抗TBM抗體發(fā)生反應(yīng)等。提示TIN-ag在小管生理與病理中具有重要意義，但其表達(dá)與CKD病理類(lèi)型的關(guān)系等目前尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。
　

6、　綜上，TIN-ag是一個(gè)高表達(dá)在小管基底膜的蛋白，在小管生理病理中起重要的調(diào)節(jié)作用。雖然目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)沒(méi)有描述TIN-ag在CKD患者中的表達(dá)情況及與疾病進(jìn)展的關(guān)系，但我們根據(jù)TIN-ag的生物學(xué)功能及以往實(shí)驗(yàn)室研究的結(jié)果，推測(cè)TIN-ag在腎小管表達(dá)可能參與了CKD的進(jìn)展，并與小管及間質(zhì)的損傷密切相關(guān)。為此，本研究旨在國(guó)內(nèi)外首次探討TIN-ag在各種病理類(lèi)型的CKD患者腎組織中的表達(dá)情況，及其與臨床表型的關(guān)系，以期為闡明CKD的發(fā)病

7、機(jī)制提供新的線(xiàn)索，同時(shí)觀察TIN-ag在CKD患者體液中的表達(dá)水平，以望為臨床診斷CKD小管損傷提供新的生物標(biāo)志物。
　　第一章，TIN-ag在慢性腎臟病患者腎組織中的表達(dá)
　　目的:觀察CKD患者腎組織中TIN-ag的表達(dá)水平，初步探討TIN-ag與各種CKD病理類(lèi)型的關(guān)系，特別是與腎小管損傷和間質(zhì)纖維化的相關(guān)性。
　　方法: CKD診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)美國(guó)腎臟病組織KDOQI指南，隨機(jī)選取CKD患者共77例。所有患者進(jìn)行腎

8、活檢，根據(jù)病理檢查結(jié)果，按病理變化類(lèi)型，分別有微小病變9例，IgA腎病23例，原發(fā)性局灶節(jié)段性腎小球硬化(Focal segmental glomerulosclerosis, FSGS)16例，原發(fā)性膜性腎病(Membrane nephropathy, MN)14例，狼瘡性腎炎(Lupusnephritis，LN)15例。所有上述病例分為兩組，①微小病變組(Minimalchange disease，MCD，n=9)，②非微小病變CK

9、D組（除微小病變組以外的其它病理類(lèi)型，NMCD，n=68）。采用HE、Masson染色觀察腎臟普通病理改變;免疫熒光檢測(cè)腎臟組織TIN-ag表達(dá)變化。
　　結(jié)果:入選患者腎組織HE染色顯示: MCD患者腎組織光鏡下腎小管、腎間質(zhì)未見(jiàn)明顯異常(圖1-1-a)，電鏡可見(jiàn)足突融合;NMCD光鏡可見(jiàn)除腎小球病變外，不同程度小管萎縮和間質(zhì)纖維化(圖1-1-b)。免疫熒光顯示:MCD組患者腎組織腎小管基底膜的TIN-ag表達(dá)清晰;原發(fā)性FSG

10、S組，IgA腎病組，MN組，LN組腎組織TIN-ag均表達(dá)較弱，尤其在萎縮的腎小管上皮間質(zhì)纖維化區(qū)域;TIN-ag免疫熒光表達(dá)強(qiáng)度定量分析顯示:NMCD組較MCD組，其腎小管TIN-ag熒光強(qiáng)度明顯下降(p＜0.01)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性FSGS組、IgA腎病組、MN組和LN組TIN-ag免疫熒光表達(dá)強(qiáng)度較MCD患者，分別下降35％、46％、35％、40％(p＜0.01)。而原發(fā)性FSGS組、IgA腎病組、MN組和LN組各組間TIN

11、-ag表達(dá)沒(méi)有差異性(p＞0.05)。另外，腎間質(zhì)膠原面積評(píng)分0分患者的TIN-ag表達(dá)量高于膠原面積評(píng)分1-3分患者的表達(dá)量(p＜0.05)，膠原面積評(píng)分為1分的患者TIN-ag表達(dá)高于膠原面積評(píng)分2-3分患者的表達(dá)，提示腎組織TIN-ag表達(dá)強(qiáng)度與腎間質(zhì)膠原含量成負(fù)相關(guān)(p＜0.05)。
　　結(jié)論:NMCD組腎組織小管基底膜TIN-ag的表達(dá)較MCD患者明顯降低;其中原發(fā)性FSGS組、IgA腎病組、MN組和LN組較MCD患者T

12、IN-ag的表達(dá)均降低，TIN-ag表達(dá)量與腎組織纖維化程度呈負(fù)相關(guān)。
　　第二章，TIN-ag在CKD患者腎組織中的表達(dá)及其與臨床表型的關(guān)系
　　目的:探討CKD患者腎組織TIN-ag表達(dá)與各項(xiàng)臨床表型的相關(guān)性。
　　方法:隨機(jī)選取經(jīng)臨床和腎臟病理診斷為CKD患者77例。免疫熒光檢測(cè)腎臟組織TIN-ag表達(dá)變化，并進(jìn)行TIN-ag表達(dá)半定量分析。同時(shí)檢測(cè)患者血肌酐、尿素氮、eGFR、24小時(shí)尿量、24小時(shí)尿蛋白、α1

13、-微球蛋白、β2-微球蛋白、病理管型、NAG酶、尿比重等臨床表型。
　　結(jié)果:
　　1.CKD患者腎組織小管TIN-ag表達(dá)量與血α1-微球蛋白濃度呈負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)-0.244，p＜0.05）。
　　2.CKD患者腎組織小管TIN-ag表達(dá)量與尿液中病理管型呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.264，p＜0.05）
　　3.CKD患者腎組織小管TIN-ag表達(dá)量與24小時(shí)尿蛋白呈負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)為0.184，p＜0.05

14、）。
　　4.CKD患者腎組織小管TIN-ag表達(dá)量與尿NAG水平呈負(fù)相關(guān)(p＜0.05)
　　5.低尿比重組患者腎組織中TIN-ag表達(dá)較正常尿比重患者組低(p＜0.05)。
　　6.TIN-ag在腎組織小管表達(dá)量與CKD患者血肌酐濃度、血尿素氮濃度、尿β2微球蛋白和eGFR等無(wú)明顯相關(guān)性(p＞0.05)。
　　結(jié)論:CKD患者腎組織中TIN-ag的表達(dá)量與血α1-微球蛋白濃度、尿中病理管型、24小時(shí)尿蛋白、N

15、AG表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)，而與血肌酐濃度、血尿素氮濃度、eGFR無(wú)明顯相關(guān)性。
　　2.慢性腎病腎組織中TIN-ag的表達(dá)與24小時(shí)尿量、血β2-微球蛋白濃度等臨床表型無(wú)明顯相關(guān)。TIN-ag在CKD腎組織小管基底膜表達(dá)水平與小管管損傷的相關(guān)指標(biāo)(NAG嗎)有密切關(guān)系，而與小球損傷指標(biāo)關(guān)系不明顯。
　　第三章，TIN-ag在CKD患者體液中的分泌與表達(dá)
　　目的:分析TIN-ag在CKD患者血液及尿液中表達(dá)水平，探討TIN-

16、ag在CKD患者體液中的含量變化是否可作為CKD小管損傷的新的生物標(biāo)記物。
　　方法:隨機(jī)選取臨床診斷CKD患者30例，健康對(duì)照組32例。ELISA檢測(cè)血液及尿液中TIN-ag蛋白表達(dá)變化，RT-PCR檢測(cè)尿液中TIN-ag mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:與健康對(duì)照組比較，CKD患者血液中TIN-ag蛋白表達(dá)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05); CKD患者尿液中TIN-ag蛋白和mRNA表達(dá)水平均低于健康對(duì)照組(p＜0.05)。