心肌缺血預(yù)處理第一相的保護(hù)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分：SD大鼠心肌缺血預(yù)處理模型的建立及評(píng)估 研究目的：1.通過建立SD大鼠心肌缺血預(yù)處理模型，取血清測(cè)心肌酶譜并觀察心肌的組織切片和超微結(jié)構(gòu)，評(píng)估預(yù)處理心肌保護(hù)作用。 2.通過觀察心肌缺血預(yù)處理過程中PTK活性的變化，旨在探討心肌缺血預(yù)處理第一相對(duì)心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)的磷酸化的調(diào)控作用。 3.通過應(yīng)用大鼠在體缺血/再灌注模型，探討心肌缺血預(yù)處理第一相對(duì)一氧化氮合酶—一氧化氮系統(tǒng)的影響。 4.通過應(yīng)用大鼠在

2、體缺血/再灌注模型，探討心肌缺血預(yù)處理第一相時(shí)第二信使系統(tǒng)的變化及其意義。 方法和結(jié)果：本研究共分四部分第一部分：SD大鼠心肌缺血預(yù)處理模型的建立及評(píng)估方法：首先應(yīng)用套管法制作在體大鼠心肌缺血/再灌注損傷模型: 用手術(shù)套管法造成左冠狀動(dòng)脈主干缺血及再灌注。實(shí)驗(yàn)中以左室前壁紫紺及同步心電圖標(biāo)S-T段抬高為結(jié)扎成功標(biāo)志。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為缺血預(yù)處理組、缺血/再灌注組、假手術(shù)組。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取血離心分離血清，檢測(cè)心肌酶譜CK，CK-MB

3、，LDH的活性。采用電子透射顯微鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果：CK，CK-MB，LDH缺血預(yù)處理組較缺血/再灌注組顯著降低,缺血預(yù)處理組與假手術(shù)組之間,CK、CK-MB顯著差異,LDH未見明顯差異。缺血預(yù)處理組: 少數(shù)線粒體輕、中度固縮或腫脹，嵴排列尚整齊，偶見斷裂；肌節(jié)清晰，可見小灶性肌絲溶解；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張；仍可見糖原顆粒；肌纖維排列尚整齊。 第二部分：心肌缺血預(yù)處理對(duì)細(xì)胞蛋白質(zhì)磷酸化的調(diào)控作用的實(shí)驗(yàn) 研

4、究方法：應(yīng)用套管法制作在體大鼠心肌缺血/再灌注損傷模型。隨機(jī)分為預(yù)處理組、缺血/再灌注組、假手術(shù)組、預(yù)處理程序組。預(yù)處理程序組根據(jù)預(yù)處理程序進(jìn)一步分為第1，2，3次缺血組和第1，2，3次再灌注組。于實(shí)驗(yàn)程序結(jié)束取心肌勻漿后，離心制備胞漿，Lowry法測(cè)定蛋白含量，生化法測(cè)定PTK活性。 結(jié)果：缺血預(yù)處理組PTK活性明顯高于缺血再灌注組，兩者間存在顯著性差異。PTK含量隨缺血及再灌注呈周期性波動(dòng)。5min缺血期相對(duì)于同一周期中的5

5、min再灌注期顯著差異。5min缺血預(yù)處理時(shí)明顯增高，間隔再灌注時(shí)明顯下降。 第三部分心肌缺血預(yù)處理對(duì)一氧化氮合酶-一氧化氮系統(tǒng)的影響 方法：取上清用于NO含量及NOS的活性測(cè)量。心肌石蠟包埋，SABC法內(nèi)皮型NOS免疫組織化學(xué)分析。 結(jié)果：NO含量及NOS活性缺血預(yù)處理組高于缺血/再灌注組，差別顯著。持續(xù)缺血前預(yù)處理程序中NO含量隨缺血及再灌注呈周期性波動(dòng)。NO在預(yù)處理程序中，5min缺血期相對(duì)于同一周期中的5

6、min再灌注期存在顯著性差異。5min缺血時(shí)明顯增高，間隔再灌注明顯下降。內(nèi)皮型NOS在心肌缺血預(yù)處理組及缺血/再灌注組中均有表達(dá)。內(nèi)皮型NOS含量在缺血預(yù)處理組明顯高于缺血/再灌注組，灰度平均值兩組也存在顯著性差異。 第四部分：第二信使在缺血預(yù)處理第一相中介導(dǎo)作用的實(shí)驗(yàn) 研究方法：所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)程序結(jié)束后, 胞漿應(yīng)用放射免疫法測(cè)量cAMP，cGMP含量及cAMP/cGMP的變化。 結(jié)果：缺血預(yù)處理組cAMP

7、，cGMP含量明顯高于缺血/再灌注組，兩者存在顯著性差異。心肌缺血預(yù)處理程序中cAMP，cGMP含量隨缺血及再灌注呈周期性波動(dòng)。預(yù)處理程序中，cAMP，cGMP含量5min缺血期相對(duì)于同一周期中的5min再灌注期，差異顯著。5min缺血預(yù)處理時(shí)明顯增高，間隔再灌注程序中明顯下降。 結(jié)論： 1.本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用大鼠左冠狀動(dòng)脈主干反復(fù)缺血/再灌注損傷建立心肌缺血預(yù)處理模型。 2.心肌缺血預(yù)處理可維持細(xì)胞膜完整性，減少心肌酶