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文檔簡介
1、目的：用腺病毒感染，脂質體轉染兩種方法將PDCD5基因導入人多發(fā)性骨髓瘤細胞KM3和U266，人慢性粒細胞白血病細胞K562、人肝癌細胞HepG2四種細胞株，比較其轉染效率，并對PDCD5 mRNA和蛋白的表達進行檢測，以探索一種適合MM細胞的外源基因導入法，為后續(xù)進行PDCD5基因促進多發(fā)性骨髓瘤細胞凋亡機制的研究提供載體。
方法：利用本實驗已構建的真核表達質粒pYr-ads-4-PDCD5，設轉染目的基因組、轉染空載體組、
2、未轉染組三組;構建及包裝腺病毒rAd-PDCD5-EGFP，設置感染目的基因組、感染空載體組、未感染組三組，分別采用脂質體LipofectamineTM2000轉染，腺病毒感染多發(fā)性骨髓瘤細胞KM3及U266細胞，人慢性粒細胞白血病細胞K562，肝癌細胞HepG2，48h后在熒光顯微鏡下觀察轉染效率，并予實時熒光定量PCR（Real-time Quantitative PCR，qPCR）、蛋白免疫印跡術(Western blot)分別檢
3、測PDCD5在四種細胞中mRNA水平和蛋白水平的表達。
結果：脂質體介導的PDCD5重組質粒對KM3，U266及K562的轉染效率分別約為45％，49％，55％，對HepG2的轉染效率約為70％，實時熒光定量PCR及Western blot測定PDCD5 mRNA表達水平和PDCD5蛋白表達水平目的基因組均明顯高于轉染空載體組和未轉染組，轉染空載體組和未轉染組間無明顯差異。腺病毒rAd-PDCD5-EGFP對KM3及U266感
4、染效率分別為33％，29％，對K562細胞感染效率為65％，但對HepG2細胞感染效率較高，約為80％，實時熒光定量PCR及Western blot測定PDCD5 RNA表達水平和PDCD5蛋白表達水平目的基因組均明顯高于感染空載體組和未感染組，感染空載體組和未感染組間無明顯差異。
結論：脂質體對KM3及U266的轉染效率高于腺病毒，脂質體轉染法對于骨髓瘤細胞而言，是一種有效的外源基因轉入方式，可為PDCD5基因促MM細胞凋亡
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