人宮頸癌Caski細(xì)胞中AnnexinA2、miR-155與EMT相關(guān)性研究.pdf

1、目的:本研究以宮頸癌Caski細(xì)胞為研究對(duì)象,分析ANXA2在EGF誘導(dǎo)的EMT過(guò)程中發(fā)揮的作用及其機(jī)制,以及miR-155對(duì)ANXA2上述功能的影響,以進(jìn)一步評(píng)估ANXA2和miR-155作為宮頸癌早期侵襲轉(zhuǎn)移指標(biāo)的潛在價(jià)值。
　　方法:(1)EGF處理人宮頸癌細(xì)胞 Caski,檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞形態(tài)、增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的影響,及ANXA2表達(dá)量的改變;(2)構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/ANXA2、pcDNA3.1(-)/miR-

2、155,并且篩選穩(wěn)定高表達(dá)ANXA2細(xì)胞株;(3)MTT法觀察克隆細(xì)胞生長(zhǎng)狀況,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的改變;(4)細(xì)胞劃痕、Transwell試驗(yàn)檢測(cè)ANXA2高表達(dá)對(duì)Caski細(xì)胞遷移能力的影響,Western blot檢測(cè)E-Cad的表達(dá);(5)構(gòu)建質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/miR155并瞬轉(zhuǎn)Caski細(xì)胞,然后用上述方法測(cè)定miR-155高表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期,細(xì)胞遷移和E-Cad表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:(1)與未做

3、任何處理的Caski細(xì)胞相比,EGF處理后Caski細(xì)胞表現(xiàn)出典型的間質(zhì)細(xì)胞樣形態(tài):細(xì)胞梭形或細(xì)長(zhǎng)形,細(xì)胞與細(xì)胞之間連接松散。Western blot結(jié)果提示EGF下調(diào)E-Cad的表達(dá),上調(diào)N-Cad的表達(dá)。FCM結(jié)果顯示EGF能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng),EGF處理48h后更多的細(xì)胞出現(xiàn)在S期(Caski細(xì)胞21.5％,Caski/EGF29.7%)和G2/M期(Caski細(xì)胞7.6%,Caski/EGF13.3%),而G0/G1其細(xì)胞明顯減少(C

4、aski細(xì)胞70.9%,Caski/EGF56.9%)。(2)EGF誘導(dǎo)的EMT過(guò)程伴隨ANXA2表達(dá)量明顯增加,且呈劑量和時(shí)間依賴(lài)性。(3)穩(wěn)定克隆細(xì)胞Caski/ANXA2比Caski、Caski/pcDNA3.1(+)細(xì)胞表現(xiàn)出更高的增殖潛能(P<0.05),而Caski與Caski/pcDNA3.1(+)細(xì)胞增殖率之間無(wú)明顯差異。高表達(dá)ANXA2使處于S期和G2-M期的Caski細(xì)胞明顯升高,而處于G0/G1期的細(xì)胞明顯下降(P

5、<0.05),提示上調(diào)ANXA2促進(jìn)Caski細(xì)胞生長(zhǎng)。(4)高表達(dá)ANXA2顯著性下調(diào)E-Cad表達(dá)水平,而miR-155高表達(dá)能逆轉(zhuǎn)ANXA2對(duì)E-Cad表達(dá)的抑制性影響。這些結(jié)果表明,ANXA2促進(jìn)EMT進(jìn)程,而miR-155作用相反。(5)Caski/ANXA2細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力明顯高于Caski和Caski/pcDNA3.1(+)細(xì)胞。而Caski細(xì)胞和Caski/pcDNA3.1(+)細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力之間無(wú)明顯差別。高表

6、達(dá)miR-155能逆轉(zhuǎn)ANXA2對(duì)Caski細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響。這些結(jié)果顯示miR-155抑制ANXA2誘導(dǎo)的Caski細(xì)胞轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論:(1)體外EGF能誘導(dǎo)Caski細(xì)胞發(fā)生EMT,并表現(xiàn)出更高的增殖潛能。(2) EGF誘導(dǎo)EMT過(guò)程伴隨著ANXA2的高表達(dá)。(3)穩(wěn)定高表達(dá)ANXA2明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。(4) ANXA2誘發(fā)細(xì)胞的惡性特征可被mir-155部分逆轉(zhuǎn)。上述結(jié)果提示,ANXA2和miR-155有作為