塞來昔布對人結(jié)腸癌裸鼠種植瘤COX-2及Survivin表達(dá)的影響.pdf

1、目的：環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)是一種誘導(dǎo)型酶，可以通過促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血管發(fā)生、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的侵襲力等多種途徑參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。Survivin是近來發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白(inhibitor ofapoptosis protein,IAP)家族成員之一，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子。Survivin在終末分化的成人組織(胸腺和生殖腺除外)中檢測不到，而在大多數(shù)腫瘤組織中有不同程

2、度的表達(dá)。 近年來結(jié)腸癌的發(fā)病率不斷上升，在全世界范圍內(nèi)威脅著人類的健康和生命，而人類80％以上的結(jié)腸癌都過表達(dá)COX-2。已有動物實驗表明，傳統(tǒng)的非甾體類抗炎藥(NSAIDs)或選擇性COX-2抑制劑可抑制遺傳的及化學(xué)誘導(dǎo)的結(jié)腸腫瘤的生長，所以探索選擇性COX-2抑制劑預(yù)防和治療人類結(jié)直腸癌的可能作用機(jī)制將有重要意義。 本實驗通過建立人結(jié)腸癌裸鼠皮下種植瘤模型，以選擇性COX-2抑制劑塞來昔布(celecoxib)對人

3、結(jié)腸癌裸鼠皮下種植瘤模型進(jìn)行干預(yù)治療，研究塞來昔布對人結(jié)腸癌裸鼠種植瘤COX-2及Survivin表達(dá)的影響。 方法：選取4～5周齡、體重20～24g BALB/c雌性裸鼠12只，取處于對數(shù)生長期的人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液(細(xì)胞密度為1×107/ml)接種與裸鼠頸背部皮下，每只0.2ml。接種完畢后，所有裸鼠于SPF條件的層流架中繼續(xù)飼養(yǎng)。定期觀察裸鼠生長情況及成瘤情況，并用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的長徑(a)、短徑(b)，

4、按公式“V=ab2/2”估算腫瘤體積。待腫瘤中位體積約100mm3(16天)后，將所有裸鼠隨機(jī)分為對照組和塞來昔布組，每組6只。塞來昔布采用灌胃方式給藥，劑量為40mg/kg，對照組喂以同體積的蒸餾水。連續(xù)用藥30天，最后一次給藥24小時后，測量腫瘤體積，以頸椎脫位方式處死裸鼠，連同包膜完整剝出腫瘤組織，部分腫瘤組織置于4％多聚甲醛溶液中固定后，用免疫組織化學(xué)染色檢測COX-2表達(dá)，COX-2陽性產(chǎn)物為棕黃色顆粒，位于細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞漿及

5、細(xì)胞核周圍呈棕黃色者判為陽性。先在低倍鏡下對組織切片全面觀察，隨后于200倍光鏡下，隨機(jī)觀察10個視野，以病理圖像分析系統(tǒng)計算平均積分光密度值；部分腫瘤組織迅速裝于凍存管中，置于液氮中保存用于Westernblot檢測Survivin表達(dá)。 數(shù)據(jù)以mean±s表示，應(yīng)用SPSS 12.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行成組t檢驗統(tǒng)計分析，P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果：1對COX-2免疫組織化學(xué)染色切片進(jìn)行積分光密度測定，對照組和塞

6、來昔布組的積分光密度值分別為15091.38±896.46和7862.12±847.72，t檢驗結(jié)果顯示，與對照組比較，塞來昔布組COX-2表達(dá)水平明顯降低(P＜0.001)。 2對照組和塞來昔布組均可見Survivin蛋白表達(dá)，與對照組相比，塞來昔布組Surivin的表達(dá)明顯減弱。 結(jié)論：1 塞來昔布可以抑制裸鼠人結(jié)腸癌種植瘤COX-2和Survivin的表達(dá)。 2.COX-2可能通過促進(jìn)Survivin的表達(dá)