Pristane誘導小鼠狼瘡模型的建立及其免疫細胞功能變化的研究.pdf

1、目的：建立Pristane誘導的小鼠系統性紅斑狼瘡(SLE)模型；觀察該模型各器官組織的炎癥病理變化特點；觀察該模型各部位免疫細胞的組成變化；檢測該模型淋巴細胞共刺激分子的表達及脾臟T細胞的活化程度；觀察絲裂原(LPS和Con A)刺激對脾淋巴細胞免疫功能的影響。
　　方法：⑴狼瘡模型的建立、生物學鑒定及其器官組織免疫和病理學檢查：0.5 ml Pristane單次腹腔注射雌性BALB/c小鼠構建小鼠狼瘡模型(對照組注射等量的生理

2、鹽水NS)；注射前及注射后每月ELISA法檢測血清抗dsDNA抗體和抗Sm/RNP抗體含量，Albustix試紙法檢測尿蛋白含量；6個月后處死全部小鼠，解剖、肉眼觀察其胸、腹腔臟器組織病變情況，并取肝、脾、肺、腎、小腸及其他病變組織做HE染色觀察其組織炎癥病理變化；直接熒光染色法觀察腎臟免疫復合物(IC)沉積及肝、肺和小腸組織T、B細胞浸潤程度；半定量RT-PCR檢測肝、肺和小腸組織炎癥性細胞因子IL-6 mRNA和Ⅰ型干擾素刺激基因(

3、ISGs) Mx1 mRNA的表達水平。⑵模型組小鼠免疫細胞組成和功能變化的研究：流式細胞術檢測造模3個月時模型組小鼠脾臟T細胞的活化程度，造模3個月和6個月時脾臟T細胞表面共刺激分子CD28、CD154、CD137和B細胞表面共刺激分子CD40、CD137L的表達，以及造模6個月時外周血、脾臟和腹腔灌洗液中各免疫細胞的組成變化；RT-PCR檢測造模6個月時脾臟CD137 mRNA和CD137L mRNA的表達水平；流式細胞術檢測造模6

4、個月時模型組小鼠外周血和腹腔灌洗液中淋巴細胞表面共刺激分子的表達；MTT法和流式細胞術檢測模型組小鼠脾淋巴細胞在絲裂原刺激下的增殖、活化、共刺激分子表達和凋亡。
　　結果：①模型組小鼠出現多種SLE樣臨床癥狀和體征，并發(fā)生肝、肺等器官組織炎癥反應：模型組小鼠造模3個月～6個月時血清抗Sm/RNP抗體和4個月～6個月時血清抗dsDNA抗體較對照組明顯增高(P<0.01)；造模6個月時其蛋白尿(≥+)陽性率和關節(jié)病變陽性率均顯著高于對

5、照組(P<0.01)；器官組織檢查發(fā)現，造模6個月時>50％的模型組小鼠出現不同程度的腎小球腎炎病變伴毛細血管壁大量IC沉積，且大多數模型組小鼠出現脾腫大，肝、肺和小腸組織T、B細胞浸潤，IL-6 mRNA和Mx1 mRNA表達上調及腹腔產生大量脂肪肉芽腫結節(jié)等器官組織炎癥反應，而對照組未見這些病變。②模型組小鼠免疫細胞組成和功能明顯異常：與對照組相比，造模3個月時模型組小鼠脾臟T細胞明顯活化(P<0.05)；造模6個月時模型組小鼠脾臟

6、中T、B細胞明顯減少(P<0.05)，漿細胞明顯增多(P<0.05)，外周血樹突狀細胞和漿細胞明顯增多(p<0.05)，腹腔灌洗液中T細胞、漿細胞和樹突狀細胞明顯增多(P<0.05)，B細胞明顯減少(P<0.05)，且各部位成熟樹突狀細胞均明顯增多(P<0.05)；造模6個月時模型組小鼠脾臟T細胞上CD28表達明顯減少(P<0.05)，CD137表達明顯增多(P<0.01)，B細胞上CD40表達明顯減少(P<0.01)，CD137L表達

7、明顯增多(P<0.05)，且其脾臟CD137 mRNA和CD137L mRNA表達上調；造模6個月時模型組小鼠外周血淋巴細胞上述幾種共刺激分子的表達與脾臟基本一致，而腹腔灌洗液中T細胞表達CD28不是減少而是明顯增多(P<0.05)；模型組小鼠脾淋巴細胞在絲裂原刺激下的增殖、活化和凋亡均較對照組明顯增強(P<0.05)，且絲裂原刺激不能糾正模型組小鼠脾淋巴細胞表面所有共刺激分子的表達異常。
　　結論：Pristane能成功誘發(fā)BA