HER-2-neu小分子干擾RNA對腦膜瘤細胞增殖活性的影響.pdf

1、目的:
　　本課題將化學(xué)合成的特異性HER-2/neu小分子干擾RNA(HER-2 siRNA)瞬時轉(zhuǎn)染至HER-2（人表皮生長因子受體-2）陽性的原代培養(yǎng)的人腦膜瘤細胞中，觀察其對離體腦膜瘤細胞增殖活性的影響。
　　方法:
　　本課題收集外科手術(shù)切除的新鮮人腦膜瘤組織進行原代培養(yǎng)，用免疫細胞化學(xué)法篩選出HER-2抗體陽性的病例作為實驗對象，然后將化學(xué)合成的特異性HER-2 siRNA瞬時轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的HER-2陽性

2、的人腦膜瘤細胞，實驗分為四組:特異性HER-2 siRNA組;陰性對照siRNA組;脂質(zhì)體組;細胞對照組。用MTT法直接測定轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細胞增殖活性的改變;用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細胞中HER-2 mRNA的水平;采用免疫細胞化學(xué)法(ICC)檢測轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細胞中HER-2蛋白的水平，以及反映細胞增殖活性的Ki-67蛋白水平;Western Blot法檢測轉(zhuǎn)染前及轉(zhuǎn)染后腦膜瘤細胞中HER-2蛋

3、白的變化。探討靶向阻斷HER-2基因后腦膜瘤在細胞水平、RNA水平和蛋白水平表達的改變，從而觀察HER-2基因與腦膜瘤生物學(xué)行為之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　特異性HER-2 siRNA瞬時轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的人腦膜瘤細胞后，MTT實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)特異性HER-2 siRNA從轉(zhuǎn)染后48h開始對原代培養(yǎng)的人腦膜瘤細胞有抑制作用，其中轉(zhuǎn)染后72h的抑制作用最強，細胞增殖抑制率可達50.08％，轉(zhuǎn)染后96h的抑制作用與轉(zhuǎn)染后72h比較沒

4、有顯著差異;從RT-PCR實驗結(jié)果可以看出，轉(zhuǎn)染后72h，特異性HER-2 siRNA組腦膜瘤細胞中的HER-2 mRNA與GAPDH比值（即HER-2 mRNA相對表達量）比空白對照組明顯降低;轉(zhuǎn)染后72h，免疫細胞化學(xué)結(jié)果顯示特異性HER-2 siRNA組腦膜瘤細胞中HER-2蛋白和Ki-67蛋白的表達較轉(zhuǎn)染前明顯減少;轉(zhuǎn)染后72h，從Westem Blot實驗結(jié)果可以看出，特異性HER-2 siRNA組腦膜瘤細胞中HER-2蛋白與