HER2小分子干擾RNA對(duì)腦膜瘤細(xì)胞增殖影響的研究.pdf

1、目的：應(yīng)用化學(xué)合成的siRNA在體外抑制人腦膜瘤細(xì)胞HER2基因的表達(dá)，探討化學(xué)合成的siRNA介導(dǎo)的RNAi在腦膜瘤基因治療的可行性。
　　方法：從新鮮無菌腦膜瘤組織中提取出原代細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并人工純化、傳代。選取免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定為HER2蛋白表達(dá)陽性的腦膜瘤細(xì)胞，設(shè)計(jì)并合成針對(duì)HER2基因的小分子干擾RNA，選用陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine（R）2000作為轉(zhuǎn)染試劑，同時(shí)設(shè)立空白組、空載體組、非特異性siRNA組、

2、及HER2 siRNA組;應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將siRNA導(dǎo)入純化的腦膜瘤細(xì)胞內(nèi)，48小時(shí)后免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測轉(zhuǎn)染后各組腦膜瘤細(xì)胞中HER2、Ki-67蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：經(jīng)EMA、Vimetin、HER2免疫細(xì)胞化學(xué)檢測，HER2陽性表達(dá)的腦膜瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)取得成功，經(jīng)過轉(zhuǎn)染后免疫細(xì)胞化學(xué)檢測顯示HER2 siRNA組較空白組、空載體組、非特異性siRNA組的HER2、Ki-67蛋白表達(dá)明顯下降（P＜0.01）;而空白組、空載體

3、組、非特異性siRNA組的HER2、Ki-67蛋白表達(dá)無明顯變化（P＞0.05），采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，提示腦膜瘤細(xì)胞中HER2蛋白表達(dá)與Ki-67 LI呈正相關(guān)(rs=0.616，P＜0.001)。
　　結(jié)論：⑴成功進(jìn)行腦膜瘤細(xì)胞的原代培養(yǎng)，并認(rèn)為腦膜瘤細(xì)胞的RNAi及體外藥物實(shí)驗(yàn)應(yīng)在第三代即開始進(jìn)行。⑵在體外實(shí)驗(yàn)中，化學(xué)合成的特異性siRNA通過RNAi可有效抑制人腦膜瘤細(xì)胞HER2蛋白表達(dá)。(3) HER2基因沉