RNA干擾her2-neu基因表達抑制肺癌A549細胞增殖的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學碩士學位論文RNA干擾her2/neu基因表達抑制肺癌A549細胞增殖的研究姓名：申萍申請學位級別：碩士專業(yè)：呼吸病學指導教師：宋勇20090407摘要研究內(nèi)容1 ．根據(jù)人H E R 2 ／n e um R N A 基因編碼區(qū)序列，設計并合成針對H E R 2 ／n e u 的1 條·2 9 n t 的小發(fā)夾R N A ( s h R N A ) 模板脫氧寡核苷酸序列，首先構(gòu)建針對H E R 2 ／n e u}。的

2、s i R N A 表達質(zhì)粒p s i l e n c e 3 ．1 ．H E R 2 ，并進行酶切鑒定和D N A 測序；2 ．利用R T - P C R 和W e s t e r nB l o t 方法對R N A i 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肺癌A 5 4 9 細胞進行了H E R 2 ／n e um R N A 和蛋白表達水平的檢測，明確R N A i 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對m R N A 和蛋白表達水平的抑制效率。3 ．觀察R N A i 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肺癌A

3、 5 4 9 細胞的增殖能力變化：將轉(zhuǎn)染2 4 h 并經(jīng)潮霉素篩選3d 后的肺癌A 5 4 9 細胞用于實驗。F C M 檢測細胞周期分布；M T T 法繪制細胞生長曲線觀察體外細胞的增殖能力。結(jié)果1 ．酶切鑒定結(jié)果顯示重組質(zhì)粒的插入片段大小與預期相符，表明寡脫氧核苷酸片段已克隆入重組質(zhì)粒；D N A 測序證實該重組質(zhì)粒序列與所設計序列完全一致，表明針對H E R 2 ／n e u 的s i R N A 表達載體已構(gòu)建成功，重組質(zhì)粒分別

4、命名為p s i l e n c e3 ．1 - H E R 2 。2 ．R T - P C R 和W e s t e r n B l o t 檢測結(jié)果顯示：p s i l e n c e r 3 ．1 ．H E R 2 轉(zhuǎn)染肺癌A 5 4 9細胞后，H E R 2 ／n e ur n R N A 和蛋白表達水平的抑制率分別達到7 4 ％、7 2 ％，表明p s i l e n c e r3 ．1 ．H E R 2 轉(zhuǎn)染可以有效抑制H

5、E R 2 ／n e u 基因表達。3 ．p s i l e n c e r3 ．1 一H E R 2 轉(zhuǎn)染對肺癌A 5 4 9 細胞增殖能力變化：F C M 結(jié)果顯示p s i l e n c e r3 ．1 ．H E R 2 轉(zhuǎn)染組細胞G o ／G l 期細胞增加，S 期細胞減少：細胞生長曲線右移、增殖速度明顯減慢。表明抑制H E R 2 ／n e u 基因表達后肺癌A 5 4 9 細胞增殖能力明顯減弱。結(jié)論1 ．設計、合成了一個針