AML1-ETO上調(diào)Cx43表達與凋亡過程中hnRNP K下調(diào)的分子機制研究.pdf

1、白血病是嚴重危害人類健康的惡性疾病.對白血病發(fā)病和細胞凋亡的分子機制研究一直是研究的熱點.本課題分別就(1)白血病相關融合蛋白AMLl-ETO上調(diào)Cx43表達的分子機制和(2)白血病細胞凋亡過程中hnRNP K蛋白下調(diào)的分子機制進行了初步研究. 第一部分研究了AMLl-ETO上調(diào)Cx43表達的分子機制.Cx43是構成細胞間縫隙連接的成分之一,屬于連接蛋白(Connexin,Cx)家族.在人類Cx家族中,Cx43研究得最為深入.除

2、了參與組成縫隙連接外,越來越多的證據(jù)表明Cx43以依賴或不依賴縫隙連接的方式抑制細胞增殖,參與多種疾病的發(fā)生,發(fā)展.本課題組最近的研究表明:t(8;21)易位產(chǎn)生的白血病相關融合蛋白AMLl-ETO可以明顯上調(diào)Cx43的表達.但是,AMLl.ETo上調(diào)Cx43表達的確切機制尚未闡明.為此,本課題對AMLl-ETO誘導Cx43表達的分子機制進行研究,結果發(fā)現(xiàn)AMLlB、AMLl-ETO都能通過AMLl順式作用元件與Cx43基因啟動子相結合

3、;但只有AMLl-ETO對該基因有轉(zhuǎn)錄活性;而且這種轉(zhuǎn)錄活性不依賴于AMLl-ETO對Cx43基因啟動子的結合;而是通過激活JNK信號傳導通路上調(diào)Cx43的表達.這些結果為深入認識AMLl-ETO相關的白血病發(fā)生機制提供了新的線索. 第二部分研究了白血病細胞凋亡過程中hnRNP K蛋白下調(diào)的分子機制.核內(nèi)不均一核糖核蛋白K(heterogenous nuclear rJbonucleoprotein K,hnRNP K)屬于核內(nèi)

4、不均一核糖核蛋白(1mRNP)家族,該家族是一類具有類似結構特征RNA結合蛋白.它們在DNA修復、端粒的生成、細胞信號轉(zhuǎn)導及基因表達的轉(zhuǎn)錄與翻譯水平上發(fā)揮著重要作用.本課題組通過同位素編碼親和標簽質(zhì)譜技術發(fā)現(xiàn)NB4細胞經(jīng)凋亡誘導劑NSC606985處理后,:hnRNP K明顯下調(diào).鑒于PKCδ剪切活化片斷及活化的caspase-3在NSC606985誘導的細胞凋亡中發(fā)揮重要作用,我們探討了PKCδ剪切活化片段、活化的caspase-3與

5、hnRNP K下調(diào)的關系,結果發(fā)現(xiàn)不僅凋亡誘導劑NSC606985處AMLI-ETO上調(diào)Cx43表達與凋亡過程中hnRNPK下調(diào)的分子機制研究理NB4細胞,導致hnRNPK顯著下調(diào);而且凋亡誘導劑As<,2>O<,3>,阿霉素和紫外線處理NB4細胞都可致hnRNPK下調(diào).進一步地,在NSC606985誘導NB4、U937細胞凋亡過程中,發(fā)現(xiàn)hnRNP K的下調(diào)發(fā)生在PKCδ、caspase-3活化之后;PKC8、caspase-3特異性

6、抑制劑rottlerin、Z-DEVD-FMK能夠抑制NSC606985引起的hnRNP K下調(diào);用NSC606985處理PKC6缺陷細胞KGla,在caspase-3活化,PARP發(fā)生剪切時,hnRNPK并不下調(diào);而在U937T<'PKCδ-cAT>細胞中誘導表達PKC6活化片斷時,hnRNP K蛋白是下調(diào)的,mRNA水平無明顯改變;蛋白酶體抑制劑PS341、MG132明顯抑制凋亡過程中hnRNPK的下調(diào). 綜合上述研究結果,