耐藥結(jié)核病產(chǎn)生的原因及沙門(mén)氏菌SPI-1功能研究.pdf

1、研究目的:闡明耐藥結(jié)核病產(chǎn)生的原因?qū)τ谡_評(píng)估臨床治療方案、制定切實(shí)有效的控制措施具有重要的意義。但傳統(tǒng)方法無(wú)法鑒別耐藥的產(chǎn)生是由同一菌株還是不同的菌株引起，本研究利用分子流行病學(xué)方法通過(guò)對(duì)上海地區(qū)1999年1月至2004年3月有治療史且耐藥表型發(fā)生改變的病人前后兩次結(jié)核分枝桿菌菌株基因型比較分析，探討耐藥的產(chǎn)生原因。 材料和方法:實(shí)驗(yàn)所用菌株來(lái)源于上海市疾病預(yù)防控制中心參比實(shí)驗(yàn)室菌株庫(kù)保存的上海地區(qū)結(jié)核病患者分離菌株。選擇保存

2、有不同時(shí)間分離的標(biāo)本且兩次結(jié)核分枝桿菌耐藥表型不同的病例作為研究對(duì)象。菌種鑒定方法按照《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。藥敏試驗(yàn)方法按照《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》中絕對(duì)濃度法進(jìn)行。結(jié)核分枝桿菌散在分布重復(fù)單位(mycobacterial interspersedrepetitive units，MIRU)基因型分型技術(shù)參考沈國(guó)妙等的方法。結(jié)核分枝桿菌IS6110限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析(IS6110—RFLP)基因型的鑒定參考D．va

3、n Soolingen等的方法。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1．入選病例基本情況：根據(jù)上海市疾病控制中心參比實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)庫(kù)統(tǒng)計(jì)資料，上海市1999年到2004年底收集保留新發(fā)結(jié)核病人的菌株共6622株，其中其中同一患者保留有兩次以上菌株的有322例，前后兩次菌株耐藥表型發(fā)生改變的有100例，對(duì)這100例患者的菌株進(jìn)行活化，由于有些患者的一個(gè)菌株丟失或活化失敗，最終獲得了有前后兩次菌株的38個(gè)病例，76個(gè)菌株。 2．通過(guò)比較同一患

4、者治療前后菌株基因型的差異，結(jié)合耐藥表型的變化，判斷耐藥的產(chǎn)生原因。如果前后菌株的MIRU和IS6110基因型均相同，耐藥表型發(fā)生改變，被認(rèn)為是獲得性耐藥；如果MIRU或IS6110基因型不同，耐藥表型發(fā)生改變的認(rèn)為是原發(fā)性耐藥。我們鑒定了所有患者前后兩次菌株的MIRU基因型，對(duì)前后兩次MIRU基因型相同的菌株，進(jìn)一步鑒定其IS6110—RFLP基因型。結(jié)果顯示，在38例耐藥表型發(fā)生改變的病例中，前后兩次菌株MIRU或IS6110—RF

5、L基因型不同的共33例，MIRU和IS6110—RFLP基因型均相同的只有5例。這提示耐藥表型的變化主要是再感染或多重感染了不同的菌株所致。為了研究耐藥產(chǎn)生的原因，我們排除了6例由耐藥變?yōu)槊舾械牟±?。?2例由敏感變?yōu)槟退幍牟±校?7例的菌株基因型發(fā)生改變，為原發(fā)性耐藥(84.4％，27/32)，5例基因型相同，為獲得性耐藥(15.6％，5/32)。 結(jié)論:有治療史的結(jié)核病患者產(chǎn)生的耐藥中84.4％為原發(fā)性耐藥。這些結(jié)果說(shuō)明在