PCR檢測(cè)沙門(mén)氏菌方法的優(yōu)化.pdf

1、本研究從對(duì)增菌方案、DNA模板的制備、引物的選擇、PCR反應(yīng)體系、避免假陰性等方面進(jìn)行對(duì)檢測(cè)沙門(mén)氏菌的PCR技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化，試圖建立一種最佳的檢測(cè)沙門(mén)氏菌的PCR技術(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.使用BPW(緩沖蛋白胨水)增菌液為培養(yǎng)沙門(mén)氏菌的增菌液，37℃增菌，不振蕩培養(yǎng)8h可以達(dá)到108cfu/mL以上，可以滿足大多PCR檢測(cè)技術(shù)靈敏度(102～106cfu/mL)的要求，過(guò)多的延長(zhǎng)增菌時(shí)間是沒(méi)有必要的；在增菌培養(yǎng)的前8h，使用選擇性

2、培養(yǎng)基和振蕩培養(yǎng)并不能提高增菌效果。這樣就建立了快速簡(jiǎn)便的樣品增菌方案。 2.從快捷、簡(jiǎn)便和經(jīng)濟(jì)角度考慮，熱裂解法是最佳的模板DNA制備技術(shù)。 3.引物的選擇上，以InvA基因的S139、S141引物進(jìn)行擴(kuò)增，其敏感性和特異性分別達(dá)到99.4％和100％，相對(duì)于其他常用的引物檢測(cè)效果較好。 4.經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)摸索，反應(yīng)條件是模板在97℃變性7min，以保證PCR的順利進(jìn)行；復(fù)性和延伸溫度為60℃lmin；用29個(gè)循環(huán)