沙門氏菌LAMP檢測(cè)方法的建立.pdf

1、當(dāng)今，全球經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展，人們的物質(zhì)生活逐漸提高，動(dòng)物源性食品的消費(fèi)量也隨之增加，隨之而來的，是步入人們的視野，愈發(fā)受到人們關(guān)注的由動(dòng)物源性食品引發(fā)的食品安全問題。根據(jù)國(guó)家食源性疾病監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)顯示的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，食源性致病菌是食源性疾病的主要原因之一。動(dòng)物源性食品中，細(xì)菌性食物中毒是最常見的，并且由于沙門氏菌中毒引起的，在全世界范圍內(nèi)食物中毒的病例中，是居于前列的。
　　目前，對(duì)沙門氏菌的生化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)和血清學(xué)鑒定等傳統(tǒng)檢測(cè)方法，需要較長(zhǎng)的

2、實(shí)驗(yàn)周期，試劑多而且雜，在快速、特異檢測(cè)方面具有一定的局限性，而各種 PCR檢測(cè)方法敏感、快速，卻需昂貴龐大的儀器設(shè)備、復(fù)雜繁瑣的電泳過程等，進(jìn)而使PCR檢測(cè)在受到條件限制的檢驗(yàn)工作中，很難得到普遍應(yīng)用。
　　環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增是Notomi等在2000年發(fā)明的一種新穎的恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)，此技術(shù)克服了傳統(tǒng)檢測(cè)方法的繁瑣以及PCR檢測(cè)方法的局限性，具有多方面的優(yōu)點(diǎn)，費(fèi)用低、反應(yīng)快的優(yōu)點(diǎn)適合應(yīng)用于高通量檢測(cè)大量樣品，易操作、結(jié)果可直接觀察

3、的優(yōu)點(diǎn)便于進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，在診斷疾病以及檢測(cè)食品安全等方面的前景極其廣闊。
　　本試驗(yàn)根據(jù)GenBank公布的沙門氏菌高度保守的腸毒素基因序列設(shè)計(jì)特異性引物，繼而將LAMP反應(yīng)體系中的反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、Mg2+濃度、內(nèi)外引物濃度比進(jìn)行優(yōu)化，并且進(jìn)行一系列的特異性、敏感性、穩(wěn)定性試驗(yàn)，并將LAMP與常規(guī)PCR進(jìn)行比較，以此來建立最適宜的環(huán)介導(dǎo)恒溫核酸擴(kuò)增體系，實(shí)現(xiàn)對(duì)沙門氏菌的特異性檢測(cè)。
　　結(jié)果顯示：LAMP方法對(duì)沙門氏