不同流場(chǎng)對(duì)細(xì)胞粘附的影響及粘附后VE-cadherin分布及表達(dá)的變化.pdf

1、血流動(dòng)力學(xué)在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中占有極為重要的地位,目前的研究結(jié)果表明剪切力的變化通過(guò)影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能狀態(tài)而導(dǎo)致各種慢性血管性疾病如動(dòng)脈粥樣硬化[1-3],特別是內(nèi)皮細(xì)胞粘附特性的改變,因?yàn)閱魏思?xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附是動(dòng)脈粥樣硬化早期核心事件。本課題組前期實(shí)驗(yàn)在新西蘭兔頸總動(dòng)脈套環(huán)復(fù)制出狹窄后動(dòng)脈粥樣硬化模型,證明動(dòng)脈狹窄后局部血流動(dòng)力學(xué)發(fā)生改變特別是局部的紊流的出現(xiàn)與動(dòng)脈粥樣硬化的形成密切相關(guān)。為了進(jìn)一步探討兩者的關(guān)系,本實(shí)

2、驗(yàn)首先建立了體外流體模型,成功的模擬出了生理層流及致病紊流,并觀察了不同流場(chǎng)對(duì)單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響及細(xì)胞粘附后內(nèi)皮細(xì)胞中VE-cadherin表達(dá)與分布變化。
　　第一部分體外模擬三種流場(chǎng)
　　目的：運(yùn)用流動(dòng)腔(FLOWCHAMBER)在體外模擬三種流場(chǎng)。
　　方法：對(duì)傳統(tǒng)流動(dòng)腔中的硅膠膜進(jìn)行改造,并通過(guò)調(diào)節(jié)流量大小從而形成不同流場(chǎng)。用FLUENT軟件對(duì)流場(chǎng)進(jìn)行計(jì)算分析。
　　結(jié)果：在體外建立了低剪切力紊

3、流、低剪切力層流、高剪切力層流。
　　結(jié)論：經(jīng)FLUENT軟件計(jì)算分析,結(jié)果表明三種流場(chǎng)的各項(xiàng)指標(biāo)符合預(yù)期要求能代表體內(nèi)流場(chǎng)的特點(diǎn)。
　　第二部分不同流場(chǎng)對(duì)細(xì)胞粘附的影響及粘附后內(nèi)皮細(xì)胞中VE-cadherin表達(dá)及分布的變化
　　目的：探討不同流場(chǎng)對(duì)THP-1單核細(xì)胞與ECV304內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響及細(xì)胞粘附后內(nèi)皮細(xì)胞VE-cadherin表達(dá)及分布的變化。
　　方法：不同的流場(chǎng)作用單層內(nèi)皮細(xì)胞及單核細(xì)胞6小時(shí)

4、,觀察不同流場(chǎng)下單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附;用Western蛋白印跡法檢測(cè)VE-cadherin的表達(dá),用免疫細(xì)胞化學(xué)方法在激光共聚焦顯微鏡下觀察 VE-cadherin蛋白在內(nèi)皮細(xì)胞中的分布變化。
　　結(jié)果：不同的流場(chǎng)作用單層ECV304內(nèi)皮細(xì)胞及THP-1單核細(xì)胞6小時(shí)發(fā)現(xiàn)低剪切力紊流下單核細(xì)胞粘附數(shù)高于低剪切力層流及高剪切力層流且在低剪切力紊流組中有大量單核細(xì)胞成簇粘附于內(nèi)皮細(xì)胞上;單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞共育0小時(shí),1小時(shí),2小時(shí),