人髓性白血病細胞K562紅系分化相關(guān)新功能基因的研究.pdf

1、紅系分化是指由造血干細胞發(fā)育為成熟紅細胞的過程。這一過程受到細胞內(nèi)多種基因和細胞因子的調(diào)控，其機制尚未闡明。RNA干擾(RNAinterference，RNAi)技術(shù)近年來成為研究基因功能的有力工具，并且從對單一基因的研究迅速擴展到全基因組水平的功能研究。本課題組之前報道了利用隨機siRNA文庫高通量篩選誘導人髓性白血病K562細胞系向紅系分化的siRNA，兩個siRNA（siRNAclone-60和siRNAclone-67）被證實能

2、夠誘導K562細胞向紅系分化。我們進一步尋找了這兩個siRNA可能作用的靶基因且驗證了這些基因的功能，希望能為腫瘤細胞的誘導分化治療及紅系分化機制的研究提供新的資料。
　　 我們利用全基因組表達譜芯片分析、標記siRNA親和純化等方法找到了siRNAclone-67與clone-60可能的一些下游靶基因，并對其中部分基因進行了功能驗證。CCDC12和SLC30A3是我們通過以上途徑找到的兩個可能的靶基因。CCDC12編碼一個含有

3、卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域的蛋白，而SLC30A3編碼鋅轉(zhuǎn)運蛋白3(ZNT3)，在神經(jīng)系統(tǒng)高級活動如學習、記憶中起重要作用，目前尚無任何文獻報道這兩種基因與紅系分化相關(guān)。
　　 本文驗證了CCDC12、SLC30A3具有促進人K562細胞向紅系分化的功能。結(jié)果顯示過表達CCDC12和SLC30A3使K562細胞的紅系分化特異標志CD235的表達升高，其中過表達CCDC12后CD235陽性細胞率由對照組的32.25％增加至78.07%，過表達

4、SLC30A3后CD235陽性細胞率由對照組的34.25%增加至95.7%；同時過表達CCDC12細胞ε一、γ-珠蛋白的表達升高，而過表達SLC30A3細胞ε-、γ-和β-珠蛋白的表達均明顯升高；過表達CCDC12和SLC30A3細胞紅系分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子GATA-2的表達均降低。此外過表達CCDC12和SLC30A3的細胞增殖速度加快。
　　 綜上所述，本文根據(jù)兩種可誘導K562紅系分化的siRNA，找到了其可能的靶基因，并驗證