IL-21對(duì)CIK細(xì)胞抗白血病系K562細(xì)胞活性作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：觀察IL-21對(duì)CIK細(xì)胞增殖、分泌、細(xì)胞亞群比例、細(xì)胞因子mRNA量表達(dá)的變化，探討IL-21對(duì)CIK細(xì)胞抗白血病系K562細(xì)胞毒性作用及其機(jī)制的影響。
　　方法：抽取健康志愿者肝素抗凝的外周全血30ml，用Ficoll溶液提取出外周血單個(gè)核細(xì)胞，將該細(xì)胞置于3個(gè)不同的無菌培養(yǎng)瓶中，隨機(jī)設(shè)為對(duì)照組(加入IL-2100ng/ml，無IL-21)、IL-21組(加IL-21,不加IL-2)、IL-21+IL-2組(加IL-21

2、與IL-2)，用含有10％FBS1640培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，每天在倒置相位差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，第0、7、10、14d用手工計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量及計(jì)算出總數(shù)量；第14d分別收取每組培養(yǎng)瓶中的懸液，離心，取上清液，用ELISA法測(cè)定上清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-10、TGF-β、IL-21量，收取細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CIK細(xì)胞亞群CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+、CD25+、CD4+CD25+比例，

3、用CCK-8檢測(cè)CIK細(xì)胞對(duì)白血病系K562細(xì)胞的毒性作用，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)穿孔素、Granzyme A、Granzyme B、Fasl、NKG2D、IL-21R mRNA表達(dá)量的變化，用Western blot法檢測(cè)CIK細(xì)胞JAK-STAT中STAT1、STAT5a、TAT3和STAT5b信號(hào)通路的變化。
　　結(jié)果：CIK細(xì)胞培養(yǎng)至第5天開始，細(xì)胞體積略有增大，數(shù)量逐漸增多，第7、10d細(xì)胞數(shù)量明顯增多，IL-21組

4、、IL-21+IL-2組細(xì)胞數(shù)量變化較對(duì)照組無明顯差異(P＞0.05），第14d細(xì)胞體積明顯較大，數(shù)量顯著增加，IL-21組細(xì)胞數(shù)量明顯低于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），IL-21+IL-2組較對(duì)照組無明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）；CIK細(xì)胞培養(yǎng)至第14天時(shí)，IL-21組、IL-21+IL-2組上清液中IFN-γ、TNF-α、IL-21量較對(duì)照組明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），IL-21組、IL-21+IL-2

5、組IL-10量較對(duì)照組明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），IL-21組、IL-21+IL-2組較對(duì)照組IL-2、TGF-β量無明顯變化，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）；IL-21組、IL-21+IL-2組細(xì)胞亞群CD25+、CD3+CD4+、CD3+CD56+比例較對(duì)照組增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），IL-21組、IL-21+IL-2組CD3+CD8+、CD4+CD25+比例較對(duì)照組無明顯變化，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）；IL

6、-21組、IL-21+IL-2組CIK細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞的毒性明較對(duì)照組明顯增強(qiáng)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；IL-21 組、IL-21+IL-2組CIK細(xì)胞穿孔素、顆粒酶B、Fasl、IL-2R、IL-21R mRNA量表達(dá)較對(duì)照組明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），IL-21組、IL-21+IL-2組顆粒酶A、NKG2DmRNA量表達(dá)較對(duì)照組無明顯變化，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）；Western blot的結(jié)果顯示

7、，IL-21組、IL-21+IL-2組的STAT3和STAT5b表達(dá)較對(duì)照組明顯升高，IL-21組、IL-21+IL-2組、對(duì)照組STAT1和STAT5a的表達(dá)無明顯差異，此結(jié)果說明IL-21可以活化CIK細(xì)胞的STAT3和STAT5b信號(hào)通路。
　　結(jié)論：IL-21誘導(dǎo)CIK細(xì)胞，無促進(jìn)增殖的作用，但可增加CD25+、CD3+CD4+、CD3+CD56+亞群比例，促進(jìn)分泌IFN-γ、TNF-α、IL-21，抑制分泌IL-10，促