重組人降鈣素基因相關(guān)肽在原核中的融合表達(dá)、純化研究.pdf

1、α降鈣素基因相關(guān)肽具有強(qiáng)大的舒張血管、降低血壓等多種生理活性，是迄今發(fā)現(xiàn)的人體內(nèi)舒血管活性最強(qiáng)的一種多肽。α降鈣素基因相關(guān)肽參與多種功能的調(diào)節(jié)，對α降鈣素基因相關(guān)肽的研究也從最初的神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)擴(kuò)展到呼吸系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、胃腸道系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)。α降鈣素基因相關(guān)肽在體內(nèi)，尤其是神經(jīng)和心血管系統(tǒng)分布廣泛，并有顯著的心血管效應(yīng)，對心血管疾病的發(fā)生和防治有重要意義。 采用大腸桿菌偏愛的密碼子對α降鈣素基因相關(guān)肽基因進(jìn)行了

2、優(yōu)化設(shè)計(jì)，用搭橋PCR方法獲得hαCGRP基因，克隆到表達(dá)載體中。測序結(jié)果表明，構(gòu)建的表達(dá)載體中的外源基因的序列與理論設(shè)計(jì)的基因序列完全一致。 融合蛋白基因在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)凝膠掃描分析，融合蛋白占總蛋白的25％。摸索誘導(dǎo)表達(dá)條件，并擴(kuò)大至發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)和表達(dá)，獲得大量菌體。破菌離心后融合蛋白表達(dá)完全在上清。上清液依次經(jīng)過ChelatingF.F.親和層析柱、SephacrylS-200分子篩柱純化，獲得了95

3、％以上純度的融合蛋白。經(jīng)WesternBolt免疫印跡鑒定該融合蛋白具有抗原性。經(jīng)體內(nèi)對融合蛋白的生物學(xué)活性進(jìn)行的初步研究表明該蛋白具有降低血壓等α降鈣素基因相關(guān)肽的生物學(xué)活性。 本研究成功構(gòu)建了α降鈣素基因相關(guān)肽融合蛋白表達(dá)載體，并在大腸桿菌中獲得表達(dá)。通過基因工程獲取較高純度和生物學(xué)活性的α降鈣素基因相關(guān)肽融合蛋白，同時(shí)對α降鈣素基因相關(guān)肽的基因的表達(dá)、純化等實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行摸索和探討，為基因工程α降鈣素基因相關(guān)肽的進(jìn)一步研究積