聯(lián)合基因修飾NSCs-D-BMSCs自體移植治療恒河猴偏側(cè)帕金森病模型.pdf

1、目的：采用分子生物學(xué)、細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)和現(xiàn)代影像學(xué)技術(shù)相結(jié)合的方法，對聯(lián)合基因修飾的NSCs-D-BMSCs在腦內(nèi)的移植情況進(jìn)行特異性的追蹤和定位，并分析其對恒河猴帕金森病模型的治療作用，為臨床正確評(píng)價(jià)細(xì)胞移植后的療效提供客觀依據(jù)。 方法：構(gòu)建pBudCE4.1-GDNF-TH真核表達(dá)質(zhì)粒，經(jīng)Nucleofector<'TM>核轉(zhuǎn)染儀轉(zhuǎn)染至標(biāo)記的NSCs-D-BMSCs,RT-PCR和細(xì)胞免疫化學(xué)檢測基因的表達(dá)情況。同時(shí)，無菌條件下

2、培養(yǎng)恒河猴BMSCs，用“Feridex一多聚賴氨酸復(fù)合物(FE-PLL)"標(biāo)記BMSCs，并用普魯士蘭染色、電鏡和臺(tái)盼藍(lán)排除實(shí)驗(yàn)鑒定FE-PLL標(biāo)記恒河猴BMSCs的活力，并對其增殖和分化能力進(jìn)行評(píng)估。然后，將FE-PLL標(biāo)記的基因修辭NSCs-D-BMSCs移植入恒河猴帕金森病模型的尾殼核內(nèi)，細(xì)胞移植.后3個(gè)月對動(dòng)物進(jìn)行<18'>F-FDGPET,<99m'>Tc-TRODAT-1SPECT檢測。細(xì)胞移植后對動(dòng)物的PD行為有所緩解，

3、行為學(xué)變化仍在進(jìn)一步觀察中<99m'>Tc-6HisSPECT和MRI對腦內(nèi)移植細(xì)胞活體示蹤，以及形態(tài)學(xué)觀察有待進(jìn)一步完成.結(jié)果:構(gòu)建的pBudCE4.1-GDNF-TH真核表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)Nucleofector<'TM>核轉(zhuǎn)染儀轉(zhuǎn)染至NSCs-D-BMSCs,RT-PCR檢測到hTH和GDNF基因的表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)顯示TH,GDNF和6His單克隆抗體呈陽性染色。菲立磁有效標(biāo)記BMSCs。普魯士藍(lán)染色顯示FE-PLL標(biāo)記BMSCs胞質(zhì)內(nèi)

4、有細(xì)小的藍(lán)色鐵顆粒。電鏡顯示FE-PLL標(biāo)記的BMSCs胞質(zhì)內(nèi)含有許多包裹鐵顆粒的囊泡。與正常未標(biāo)記的細(xì)胞相比較，F(xiàn)E-PLL標(biāo)記對BMSCs的活力、增殖和分化等能力沒有明顯的影響。另外，PET和SPECT檢查發(fā)現(xiàn)PD猴雙側(cè)紋狀體、丘腦影像不對稱，右側(cè)(即造模側(cè))SUVave較左側(cè)明顯減低，而細(xì)胞移植猴右側(cè)ROl區(qū)SVave有所增強(qiáng)。細(xì)胞移植后對動(dòng)物的PD行為有所緩解，行為學(xué)變化仍在進(jìn)一步觀察中。<99m'>Tc-6HisSPECT和M