腺病毒介導MC148基因對β趨化因子的拮抗作用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該課題運用腺病毒作為真核表達載體,將MC148基因進行體內外轉染,研究其對趨化因子的拮抗作用,以期減少移植物內白細胞浸潤,抑制免疫排斥反應,并為進一步運用于基因治療打下基礎.在第一部分實驗中,首先從傳染性軟疣病毒中擴增MC148基因,PCR產物經測序后,用BamH I、EcoR I內切酶進行雙酶切并與經同樣雙酶切的質粒載體pUC19連接.重組載體轉染JM109大腸桿菌擴增,提取的重組質粒進一步對克隆的基因測序.在第二部分實驗中,將已克隆

2、的MC148基因從重組質粒pUC19-MC148上酶切下來,末端添平后與cosmid質粒pAxCAwt連接構建穿梭質粒.將此穿棱質粒經包裝并擴增,提純后與腺病毒DNA-TPC共轉染293細胞,通過同源重組成功構建了Ad-MC148腺病毒重組體,并進行了克隆篩選和滴度滴定.在第三部分中,Ad-MC148腺病毒重組體轉染293細胞大量擴增,上清中提純MC148P蛋白并測定其拮抗β趨化因子MCP-1和RANTES的生物學活性.在第四部分,以大

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