ELMO1對巨噬細胞的吞噬作用及炎癥反應中相關(guān)因子表達的影響.pdf

1、ELMO1（Engulfment and cell motility protein1，ELMO1）基因位于人第七號染色體上，在小鼠細胞內(nèi)定位在第十三號染色體，編碼的ELMO1蛋白在細胞的遷移和吞噬過程中扮演著重要的角色，失控的細胞遷移和吞噬會導致炎癥相關(guān)疾病的發(fā)生甚至腫瘤轉(zhuǎn)移。巨噬細胞由來源于骨髓的單核細胞分化而來，機體所有組織中都有這種細胞的存在，且它還是造血系統(tǒng)中可塑性最強的一種免疫細胞。巨噬細胞既是機體非特異性免疫的重要組成細胞

2、，也在特異性免疫反應中有著呈遞抗原的作用，是體內(nèi)一種具有多種功能和用途的細胞，這些多樣性功能賦予它在正常發(fā)育、體內(nèi)平衡、組織修復和對病原菌的免疫反應中有不同作用。在非特異性免疫中，它能通過吞噬作用除去機體中侵入的病原菌和死細胞以及碎片;在特異性免疫反應中攝取并遞呈外援性異物，通過分泌細胞因子和趨化因子誘導和調(diào)節(jié)免疫應答。幾乎每一種人類疾病都涉及到巨噬細胞，它們也被作為主要的治療目標，因為它們的這些多樣性功能可以被定向的加強或抑制，以改變

3、疾病的結(jié)果。LPS刺激巨噬細胞后，通過TLR4受體激活調(diào)控細胞內(nèi)炎癥因子相關(guān)基因的表達。ELMO1基因參與細胞的遷移和吞噬作用，而巨噬細胞在機體的固有免疫和適應性免疫中發(fā)揮重要作用，為了探究ELMO1是否可以調(diào)節(jié)巨噬細胞的吞噬作用和分泌功能，以及涉及到哪些分子機制。首先，實驗室通過構(gòu)建了ELMO1基因的干涉載體PLVX-shRNA及其對照質(zhì)粒，包被慢病毒后感染RAW264.7細胞系，擴大培養(yǎng)后用流式細胞儀分選出穩(wěn)定表達的細胞系，采用鏡下

4、觀察細胞形態(tài)，然后用穩(wěn)定表達細胞系的細胞去吞噬標記熒光標簽的大腸桿菌顆粒，流式細胞儀分析吞噬效率。然后，本實驗室成功建立ELMO1基因敲除小鼠，從小鼠腹腔取得原代巨噬細胞或者由小鼠骨髓細胞誘導分化而來的巨噬細胞先用流式細胞儀檢測純度或分化效率，再通過吞噬指數(shù)法去檢測野生型和敲除型吞噬效率，并從蛋白水平檢測LPS刺激后炎癥因子的表達情況。
　　結(jié)果表明:ELMO1基因表達降低后細胞的吞噬能力變?nèi)?在小鼠的原代巨噬細胞中，敲除型細胞內(nèi)