SAA對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞SR-BI和炎癥因子表達(dá)的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、目的：B類I型清道夫受體(scavenger receptor class B typeI,SR-BI)是介導(dǎo)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)(reverse cholesterol transport,RCT)最重要的膜蛋白之一，它對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis, As）有保護(hù)作用。最新研究發(fā)現(xiàn)，炎癥反應(yīng)能影響RCT，進(jìn)而影響周圍血管膽固醇外流及As的發(fā)生發(fā)展。血清淀粉樣蛋白A(serum amyloid-a, SAA)能誘導(dǎo)人體巨噬細(xì)胞

2、炎癥反應(yīng)，顯著增加脂多糖（lipopolysaccharides, LPS）誘導(dǎo)的炎癥產(chǎn)物IL-10，TNF-α，和IL-6的表達(dá)，且能抑制高密度脂蛋白的抗炎作用,促進(jìn)As的進(jìn)展。本實(shí)驗(yàn)主要觀察SAA對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞SR-BI及炎癥反應(yīng)表達(dá)調(diào)節(jié)的影響，并探討其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：培養(yǎng)THP-1細(xì)胞株，用160 nmol/L的佛波酯（phorbol12-myristate13-acetate， PMA）刺激細(xì)胞12小時(shí)，使其誘

3、導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞，換無(wú)血清培養(yǎng)基，分小組以不同濃度的SAA（0，100，200，400，800 ng/ml）處理 THP-1巨噬細(xì)胞24小時(shí)，或以400ng/ml的SAA處理細(xì)胞不同時(shí)間（0，4，8，16，32小時(shí)），或以400 ng/ml的SAA分別與P38激動(dòng)劑(anisomycin)或抑制劑(SB203580)共同處理細(xì)胞24小時(shí)，分別采用RT-PCR檢測(cè)SR-BImRNA的表達(dá)，Western blot檢測(cè)磷酸化P38蛋白的表達(dá)

4、，Western blot及細(xì)胞免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞SR-BI的表達(dá)，ELISA檢測(cè)炎癥因子（MCP-1、TNF-α、IL-1β）的表達(dá)。
　　結(jié)果：與空白對(duì)照組相比，SAA處理細(xì)胞后，炎癥因子（MCP-1、TNF-α、IL-1β）的表達(dá)上調(diào)，而SR-BI mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)受到抑制，這種效應(yīng)呈濃度和時(shí)間依賴性，并且磷酸化P38蛋白質(zhì)的表達(dá)也上調(diào)；與SAA單獨(dú)處理組比較，SAA與P38激動(dòng)劑共同處理細(xì)胞后，其SR-BI表達(dá)

5、下調(diào)，炎癥因子及磷酸化P38蛋白表達(dá)增加；而SAA與P38抑制劑共同處理細(xì)胞后，其SR-BI表達(dá)相對(duì)增加，炎癥因子及磷酸化P38蛋白表達(dá)相對(duì)減少。
　　結(jié)論：SAA增加THP-1巨噬細(xì)胞炎癥因子（MCP-1、TNF-α、IL-1β）的表達(dá)，抑制SR-BI的表達(dá)，促進(jìn)THP-1巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)；SAA的作用可能與P38蛋白的磷酸化有關(guān)，P38-MAPK信號(hào)途徑可能參與了SR-BI的表達(dá)調(diào)節(jié)及SAA刺激的THP-1巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)。S