谷維素抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥因子表達及其分子機理.pdf

1、谷維素(Oryzanol)是米糠中主要活性成分之一，米糠是稻谷加工的主要副產(chǎn)品，近年我國年米糠產(chǎn)量超過1000萬噸，研究其活性成分的生理功能，對開發(fā)增加米糠的高附加值具有重要意義。最近研究表明谷維素具有抗炎生物活性，其抗炎功能分子機制尚不清楚，脂多糖(LPS)激活巨噬細(xì)胞炎癥是抗炎相關(guān)研究中的常用模型，本文利用LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥模型，研究谷維素抗炎作用分子機制。
　　谷維素對LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞活性和凋亡

2、的影響:設(shè)置對照組、谷維素保護組（10、20和40μg/mL）、LPS組和LPS+（10、20和40μg/mL）谷維素保護組，處理24h，測定OD值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)谷維素在10-40μg/mL范圍內(nèi)對RAW246.7沒有顯著影響(P＞0.05)。用Hoechst33342染色、鏡檢，結(jié)果表明10～40μg/mL谷維素對LPS誘導(dǎo)的RAW246.7細(xì)胞凋亡無明顯影響。因此選定谷維素濃度范圍(10-40μg/mL)，用于后續(xù)實驗。
　　谷維

3、素對LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥因子mRNA表達水平的影響:設(shè)置對照組、LPS組和（10、20和40μg/mL）谷維素保護組，與Control組相比，LPS組細(xì)胞COX-1、COX-2、IL-1β、IFN-γ、TNF-α和iNOS表達差異極顯著(P＜0.01)，與LPS組相比，谷維素保護組中與COX-1基因表達量無顯著性差異(P＞0.05)，COX-2、IL-1β、IFN-γ、TNF-α和iNOS表達量具有顯著性差異(P＜0.05

4、)。
　　谷維素對LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥因子蛋白水平的影響:LPS組對比對照組TNF-α、IL-1β和iNOS蛋白質(zhì)表達明顯上升，對比LPS組，谷維素組能夠降低TNF-α、IL-1β和iNOS蛋白質(zhì)表達，且呈劑量依賴性。
　　谷維素對核轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NFκB核移位的影響:與Control組相比，LPS刺激后RAW264.7細(xì)胞漿中c-Jun和p65蛋白表達顯著減少，細(xì)胞核中表達量顯著增加，p65蛋白表達變化量

5、具有顯著性差異(P＜0.05)，c-Jun蛋白表達變化量具有極顯著性差異(P＜0.01)。谷維素組能夠抑制了AP-1和NFκB的核移位。
　　谷維素對AP-1和NFκB與對應(yīng)DNA結(jié)合位點結(jié)合和轉(zhuǎn)錄活性的影響:對照組中，未檢測到特異性寡核苷酸探針與AP-1和NFκB結(jié)合，LPS組中NFκB和AP-1與特異性寡核苷酸探針復(fù)合物明顯高于正常對照組(P＜0.01)，在LPS刺激后，巨噬細(xì)胞核內(nèi)的AP-1和NFκB結(jié)合能力增強。谷維素保護

6、組（10μg/mL、20μg/mL)細(xì)胞核內(nèi)AP-1結(jié)合能力低于LPS組，且呈劑量依賴性，并發(fā)現(xiàn)谷維素能抑制核內(nèi)AP-1和NFκB的轉(zhuǎn)錄活性，抑制效果與谷維素濃度成正比。
　　許多炎癥因子如COX-2、IL-1β、IFN-γ、TNF-α和iNOS等在其基因的啟動子區(qū)域均存在一個或多個AP-1和NFκB結(jié)合位點（順式作用元件），轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NFκB的活化是炎癥因子表達調(diào)控的主要方式。綜合分析實驗結(jié)果，提示谷維素抗炎作用可能的分