大針茅干旱脅迫下qRT-PCR內(nèi)參基因的篩選及PIP2s基因的表達(dá)分析.pdf

1、大針茅（Stipa grandis P.Smirn）是亞洲中部特有的典型草原種，對(duì)大針茅的實(shí)生苗經(jīng)干旱脅迫處理后，進(jìn)行了如下研究:
　　根據(jù)已公布的內(nèi)參基因序列設(shè)計(jì)引物，利用qRT-PCR方法，從肌動(dòng)蛋白基因（Act2）、微管蛋白a基因(TUB-a)、微管蛋白b基因（TUB-b）、18S核糖體RNA基因(18SrRNA)、甘油醛-3磷酸脫氫酶基因(GAPDH)、真核延伸因子基因（EF-1a）、RNA聚合酶Ⅱ基因(RNA POLⅡ)

2、、腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶基因(APRT)、翻譯因子基因(TLF)9個(gè)候選基因中，利用△Ct值分析法及geNorm、NormFinder軟件分析法綜合比較各個(gè)候選基因的穩(wěn)定值，篩選出在干旱脅迫下大針茅根部表達(dá)最穩(wěn)定的內(nèi)參基因是18S rRNA，其次是EF-1a和TLF,最不穩(wěn)定的內(nèi)參基因?yàn)镽NA POLⅡ;其中最穩(wěn)定的內(nèi)參基因組合為18S rRNA和EF-1a。在葉片中表達(dá)穩(wěn)定的內(nèi)參基因順序依次為18S rRNA、TLF和EF-1a，最不穩(wěn)

3、定的內(nèi)參基因是TNB-b;其中最穩(wěn)定的內(nèi)參基因組合為18S rRNA和TLF。
　　根據(jù)已經(jīng)克隆的大針茅PIP2;1和PIP2;2基因保守區(qū)序列設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，利用qRT-PCR方法對(duì)大針茅水孔蛋白基因PIP2;1和PIP2;2的表達(dá)進(jìn)行研究，結(jié)果表明:在干旱脅迫下大針茅的PIP2;1和PIP2;2基因在根部的表達(dá)量均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于葉片的表達(dá)量，并且隨著干旱脅迫強(qiáng)度的增加這兩個(gè)基因的表達(dá)量都不同程度的上調(diào)，其中PIP2;1基因在干旱脅迫2